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維生素B1（VB1）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0596 | 售價(jià)（元） | 1200 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0596 |
維生素B1（VB1）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96 |
測(cè)定意義：
維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶性維生素，在生物體能量代謝中有重要的作用。
測(cè)定原理：
VB1在堿性條件下還原鐵氰化鉀生成亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，在704nm有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0596-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
70ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
1ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
2ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
2ml |
4℃避光 |
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試劑四：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑五：液體 |
3ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
樣本處理：
1. 組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4ml，混勻后于25℃，16000rpm離心10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30min）。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；加蒸餾水0.4ml，混勻后于25℃，16000rpm離心10min，取上清測(cè)定。
3. 血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
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空白管 |
測(cè)定管 |
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樣品（μl） |
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20 |
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試劑一（μl） |
20 |
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試劑二（μl） |
16 |
16 |
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試劑三（μl） |
20 |
20 |
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充分混勻，80℃反應(yīng)10min |
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提取液（μl） |
16 |
16 |
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試劑四（μl） |
44 |
44 |
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試劑五（μl） |
24 |
24 |
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H2O（μl） |
60 |
60 |
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充分混勻，靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定704nm處吸光值，記為A空白管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A空白管。 |
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計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y為△A（A測(cè)定管-A空白管）
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V樣總）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB1含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.017
= 58.8×（△A-0.0031）
V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y為△A（A測(cè)定管-A空白管）
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr
= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V樣總）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB1含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.0085
= 117.65×（△A-0.0031）
V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1. 若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過2，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2. 蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再重新測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3. 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。
4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.1-10μg/ml。