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維生素B6(VB6)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)

貨號(hào) SH0597 售價(jià)(元) 660
規(guī)格 50T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0597

維生素B6(VB6)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)

50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

維生素B6Vitamin B6又稱吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在,是一種水溶性維生素,在細(xì)胞中參與多種蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝,對(duì)生物體具有極其重要的作用。

測(cè)定原理:

VB64-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物,在390nm有特征吸收峰。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0597-50T/48S

Storage

提取液:液體

35ml

4℃

試劑一:液體

1ml

4℃

試劑二:液體

12ml

4℃

試劑三:液體

18ml

   4℃避光

試劑四:液體

18ml

   4℃避光

說(shuō)明書(shū)

一份

自備儀器和用品:

天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1 ml玻璃比色皿、蒸餾水。

樣本處理:

1. 組織:將樣品磨碎,按照質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入0.6ml提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸餾水0.4ml,混勻后于25℃,16000rpm離心10min,取上清測(cè)定(動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘)。

2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入0.6ml提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);加蒸餾水0.4ml,混勻后于25℃16000rpm離心10min,取上清測(cè)定。

3. 血清:直接測(cè)定。                

測(cè)定操作:

 

空白管

測(cè)定管

樣品(μl

 

200

試劑一(μl

200

 

試劑二(μl

200

200

試劑三(μl

300

300

試劑四(μl

300

300

充分混勻,25℃反應(yīng)20min,于1ml玻璃比色皿,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定390nm處吸光值,記為A空白管和A測(cè)定管,A=A測(cè)定管-A空白管??瞻坠苤灰鲆还?。

計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.3635x+0.0205,R2 = 0.9986

1. 按照蛋白含量計(jì)算

VB6含量(μg/mg prot=△A - 0.0205÷ 0.3635×V反總÷V×Cpr

                    = 13.76×△A - 0.0205÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VB6含量(μg/g=△A - 0.0205÷ 0.36359 ×V反總÷V×W÷V樣總)

                = 13.76×△A - 0.0205÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VB6含量(μg/104 cell=△A - 0.0205÷ 0.3635×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)

                     = 13.76×△A - 0.0205÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

VB6含量(μg/ml=△A - 0.0205÷ 0.3635×V反總÷V

                  =13.76×△A - 0.0205

V反總:反應(yīng)總體積,1ml;:V樣:加入樣本體積,0.2ml;V樣總:加入提取液體積,1ml; Cpr:蛋白濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g

注意事項(xiàng):

1. 若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò)1,請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 蛋白濃度較高的樣品,比如動(dòng)物組織,若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生,將樣本稀釋后再測(cè)定,在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。