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胰蛋白酶測定試劑盒(分光光度法 50T/48S)

貨號 SH0589 售價(元) 696
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0589

胰蛋白酶(Trypsin)試劑盒(分光光度法 50T/48S)

50管48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構成的肽鏈,是一種重要的消化酶。此外,胰蛋白酶還廣泛應用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。

測定原理:

胰蛋白酶催化水解TAME的酯鍵,釋放出的游離羧基與反應體系中的氫氧化鈉發(fā)生中和反應,導致溶液的pH值降低,以苯酚紅為指示劑,測定溶液在555nm處吸收值的變化,可以快速測得胰蛋白酶活性數(shù)據(jù)。胰蛋白酶在一定范圍內(nèi)與555nm處吸收值的降低呈良好的線性關系。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0589-50T/48S

Storage

提取液:液體

60ml

4℃

試劑一:液體

10ml

4℃

試劑二:液體

10ml

4℃避光

試劑三:液體

4ml

4℃

說明書

一份

 

自備儀器和用品:

紫外可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取:

1、組織樣品:

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液)冰浴勻漿,10000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。

 

測定步驟:

1、 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至555nm,蒸餾水調(diào)零。

工作液的配制:臨用前根據(jù)用量按照試劑一(V):試劑二(V):蒸餾水(V):試劑三(V=1 ml1 ml5.4 ml0.4 ml的比例充分混合。(注意:現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少,在空瓶中配制,試劑盒中帶有4個空瓶)

3. 吸取25μl樣本,加入975 μl工作液,混勻后立即測定,記錄555nm1min時的吸光值A12min時的吸光值A2。計算△A=A1-A2

注意:如果△A小于0.005,可將反應時間延長到5min。如果△A大于0.5,體系迅速變色,可將樣本用提取液稀釋后測定(建議稀釋10倍),計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

胰蛋白酶活性計算公式:

使用石英比色皿測定的計算公式如下

1)按蛋白濃度計算

活性單位定義:室溫下每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化555nm處吸光值減少11個酶活單位。

胰蛋白酶(U/mg prot= △A ×V反總 ÷Cpr×V1÷T

=40×△A ÷Cpr

 

 

2)按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:室溫每克組織每分鐘催化555nm處吸光值減少11個酶活單位。

胰蛋白酶(U/g 鮮重)= △A×V反總÷W×V1÷V2÷T

=40×△A ÷W

 

Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;W:組織質(zhì)量(g);V1:加入反應體系中粗酶液體積(ml),25 μl=0.025 ml;V2:粗酶液總體積(ml),1 ml;V反總:反應總體積,1 ml;T:反應時間(min),1 min。

 

 

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