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胰蛋白酶測(cè)定試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0590 | 售價(jià)（元） | 1320 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0590 |
胰蛋白酶（Trypsin）測(cè)定試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈，是一種重要的消化酶。此外，胰蛋白酶還廣泛應(yīng)用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。
測(cè)定原理：
胰蛋白酶催化水解TAME的酯鍵，釋放出的游離羧基與反應(yīng)體系中的氫氧化鈉發(fā)生中和反應(yīng)，導(dǎo)致溶液的pH值降低，以苯酚紅為指示劑，測(cè)定溶液在555nm處吸收值的變化，可以快速測(cè)得胰蛋白酶活性數(shù)據(jù)。胰蛋白酶在一定范圍內(nèi)與555nm處吸收值的降低呈良好的線性關(guān)系。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0590-100T/96S |
Storage |
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提取液 |
120ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
5ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
2ml |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、 組織樣品：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）冰浴勻漿，10000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測(cè)定步驟：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到555 nm。
2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：蒸餾水（V）：試劑三（V）=1 ml：1 ml：5.4 ml：0.4 ml的比例充分混合。（注意：現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個(gè)空瓶）
3. 吸取5ul樣本，加入195 ul工作液，混勻后立即測(cè)定，記錄555nm下1min時(shí)的吸光值A1和2min時(shí)的吸光值A2。計(jì)算△A=A1-A2
注意：如果△A小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果△A大于0.5，體系迅速變色，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定（建議稀釋10倍），計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
胰蛋白酶活性計(jì)算公式：
使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：室溫下每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化555nm處吸光值減少0.5為1個(gè)酶活單位。
胰蛋白酶（U/mg prot）= △A ×V反總 ÷（Cpr×V1）÷0.5÷T
=80×△A ÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：室溫每克組織每分鐘催化555nm處吸光值減少0.5為1個(gè)酶活單位。
胰蛋白酶（U/g 鮮重）= △A×V反總÷（W×V1÷V2）÷0.5÷T
=80×△A ÷W
Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；W：組織質(zhì)量（g）；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），5 ul=0.005 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1 ml；V反總：反應(yīng)總體積，0.2 ml；T：反應(yīng)時(shí)間（min），1 min。
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