當(dāng)前位置： 首頁 - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
漆酶檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)
| 貨號 | SH0431 | 售價（元） | 600 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
|
SH0431 |
漆酶（Laccase）試劑盒(分光光度法50T/24S) |
50管/24樣 |
測定意義：
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。
測定原理：
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。
組成：
|
產(chǎn)品名稱 |
SH0431-50T/24S |
Storage |
|
提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
|
試劑一：液體 |
50ml |
4℃ |
|
工作液：粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
|
說明書 |
一份 |
|
工作液：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加25ml試劑一溶解；用不完的試劑4℃保存一周。
需自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
酶液提?。?/span>
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min，取上清，置冰上待測。
2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
3、培養(yǎng)液：直接檢測。
測定步驟：
|
試劑名稱(μl) |
對照管 |
測定管 |
|
樣本（μl） |
150 |
150 |
|
試劑一（μl） |
850 |
|
|
工作液（μl） |
|
850 |
60℃水浴20min后冷卻至室溫，取上清液測定420nm處吸光值A，△A=A測定管-A對照管。
注意事項
1、極少數(shù)樣本在60℃水浴20min后會出現(xiàn)沉淀，可經(jīng)過8000g 25℃離心10min后，取上清檢測，例如成熟的水稻葉片樣本。
2、為確保檢測準(zhǔn)確性，若ΔA大于2，將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測，計算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
酶活性計算公式：
1、按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr
2、按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷W
3、按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/104 cell）= 
×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4、按照液體體積計算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= 
×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.15ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min。