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分子診斷在任何診斷實(shí)驗(yàn)室中都是必不可少的。與此同時(shí)，快速檢測(cè)產(chǎn)品已經(jīng)成為公眾關(guān)注的焦點(diǎn)。Milenia HybriDetect是一個(gè)通用平臺(tái)，可用于基于側(cè)流免疫層析的快速診斷方法開(kāi)發(fā)。
什么是Milenia HybriDetect?
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Milenia HybriDetect是一種通用的側(cè)向流動(dòng)開(kāi)發(fā)平臺(tái)，供各研究人員開(kāi)發(fā)獨(dú)特的快速檢測(cè)方法。它是一個(gè)多功能的工具，可以檢測(cè)DNA, RNA，蛋白質(zhì)，多肽，抗體，代謝物，細(xì)胞等…
在過(guò)去的幾年里，核酸擴(kuò)增和側(cè)流層析的結(jié)合已經(jīng)發(fā)展成為一個(gè)重要的診斷方法。通用型側(cè)向流動(dòng)裝置是快速診斷方法的必要組成。因此，Milenia HybriDetect非常適合在各種環(huán)境下進(jìn)行高敏感和高特異的核酸檢測(cè)。
目前，Milenia HybriDetect“家族”包含兩種試紙條，都包含一條質(zhì)控線，以確認(rèn)分析的準(zhǔn)確性。Milenia HybriDetect 包含一條測(cè)試線，而Milenia HybriDetect 2T包含兩條測(cè)試線。兩種試紙條基本上都是“裸露”的條帶，沒(méi)有包含在塑料外殼中，方便各種應(yīng)用，例如將試紙條直接放在小型反應(yīng)管，如96孔板或PCR管。
如何進(jìn)行側(cè)流免疫層析
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操作簡(jiǎn)單是側(cè)流層析方法除了穩(wěn)定和省時(shí)之外最重要的優(yōu)點(diǎn)。將樣品直接應(yīng)用于上樣區(qū)后，將HybriDetect放置在足夠體積的緩沖液中，幾秒鐘后，就可以看到金顆粒在整個(gè)分析膜上遷移。通常需要2到5分鐘，即可出現(xiàn)清晰的信號(hào)。Milenia HybriDetect試紙條也可直接放入樣品或含有樣品的緩沖液中。最終通過(guò)檢測(cè)線來(lái)判斷樣品的陽(yáng)性或陰性信息。
Milenia HybriDetect是如何工作的？
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Milenia HybriDetect可用于檢測(cè)多種帶有特定標(biāo)記的靶分子。不論是核酸擴(kuò)增產(chǎn)物還是蛋白、抗體，只要帶有標(biāo)記就可以使用HybriDetect試紙條來(lái)檢測(cè)，因此該試紙條的應(yīng)用場(chǎng)景是非常廣泛的。
圖1. Milenia HybriDetect的檢測(cè)原理
場(chǎng)景一：檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物
HybriDetect通常用于DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的快速檢測(cè)。許多客戶會(huì)使用帶有Biotin、FITC/FAM修飾的引物，反應(yīng)產(chǎn)物包含這些標(biāo)簽，從而可以在HybriDetect試紙條上被檢測(cè)到。如PCR和多種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(如LAMP-LFA)均可以和HybriDetect一起應(yīng)用。此外，由于標(biāo)記探針的特異性雜交，這種方法允許大量核酸(如核糖體RNA)的直接檢測(cè)（無(wú)需擴(kuò)增）。
圖2. 標(biāo)記引物合并到擴(kuò)增產(chǎn)物中，該產(chǎn)物可在Milenia HybriDetect的測(cè)試線(T)上檢測(cè)到
場(chǎng)景二：檢測(cè)報(bào)告基因
報(bào)告基因需要包含相關(guān)標(biāo)簽(Biotin、FITC/FAM)。在檢測(cè)過(guò)程中，該報(bào)告基因以某種方式降解。報(bào)告基因的狀態(tài)可以利用Milenia HybriDetect進(jìn)行檢測(cè)。
圖3. 報(bào)告基因的檢測(cè)原理。雙標(biāo)記報(bào)告基因在檢測(cè)反應(yīng)中被降解。降解程度的增加與c線強(qiáng)度的增加相關(guān)。
基于報(bào)告基因的檢測(cè)方法在分子生物學(xué)應(yīng)用中發(fā)揮著越來(lái)越大的作用。基于CRISPR/ CAS的分析(例如SHERLOCK或DETECTR)，利用HybriDetect，可以用于新型檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)。
場(chǎng)景三. 非競(jìng)爭(zhēng)性(免疫)分析
在下面的例子中，使用了一種具有完全不同生物成分的分析策略。Milenia HybriDetect適合作為發(fā)展個(gè)體抗體為基礎(chǔ)的快速檢測(cè)的通用平臺(tái)。針對(duì)不同表位的特異性抗體必須用生物素和FITC/FAM進(jìn)行標(biāo)記。這些一抗能夠結(jié)合靶標(biāo)分子。
圖4. 非競(jìng)爭(zhēng)性(免疫)分析，標(biāo)記抗體能夠特異性結(jié)合靶標(biāo)分子，這種“三明治”結(jié)構(gòu)可以HybriDetect試紙條上檢測(cè)到。
通過(guò)使用這種標(biāo)記和檢測(cè)策略，已經(jīng)建立的免疫分析(如ELISA)可以很容易地轉(zhuǎn)化為側(cè)流層析檢測(cè)形式。
場(chǎng)景四. 競(jìng)爭(zhēng)性（免疫）分析
在競(jìng)爭(zhēng)性的LFAs中，信號(hào)的減弱或缺失與靶標(biāo)分子的存在有關(guān)。檢測(cè)線強(qiáng)度的減弱表明陽(yáng)性結(jié)果。測(cè)試強(qiáng)度不變代表陰性測(cè)試結(jié)果。下圖說(shuō)明了使用Milenia HybriDetect進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)的原理。
圖5.競(jìng)爭(zhēng)(免疫)分析法的原理。標(biāo)記的靶標(biāo)與未標(biāo)記的靶標(biāo)(在樣品中)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記抗體。T線強(qiáng)度的降低與靶標(biāo)分子的增加相關(guān)。
當(dāng)然，HybriDetect試紙條作為一種通用型側(cè)流分析平臺(tái)，還有非常廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景。目前已發(fā)表的超過(guò)250篇引用文獻(xiàn)，涉及藥物開(kāi)發(fā)、獸醫(yī)、食品安全、農(nóng)業(yè)研究、分子診斷試劑盒等等多個(gè)領(lǐng)域。
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