分子診斷在任何診斷實驗室中都是必不可少的。與此同時，快速檢測產(chǎn)品已經(jīng)成為公眾關(guān)注的焦點。Milenia HybriDetect是一個通用平臺，可用于基于側(cè)流免疫層析的快速診斷方法開發(fā)。
什么是Milenia HybriDetect?
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Milenia HybriDetect是一種通用的側(cè)向流動開發(fā)平臺，供各研究人員開發(fā)獨特的快速檢測方法。它是一個多功能的工具，可以檢測DNA, RNA，蛋白質(zhì)，多肽，抗體，代謝物，細胞等…
在過去的幾年里，核酸擴增和側(cè)流層析的結(jié)合已經(jīng)發(fā)展成為一個重要的診斷方法。通用型側(cè)向流動裝置是快速診斷方法的必要組成。因此，Milenia HybriDetect非常適合在各種環(huán)境下進行高敏感和高特異的核酸檢測。
目前，Milenia HybriDetect“家族”包含兩種試紙條，都包含一條質(zhì)控線，以確認分析的準確性。Milenia HybriDetect 包含一條測試線，而Milenia HybriDetect 2T包含兩條測試線。兩種試紙條基本上都是“裸露”的條帶，沒有包含在塑料外殼中，方便各種應(yīng)用，例如將試紙條直接放在小型反應(yīng)管，如96孔板或PCR管。
如何進行側(cè)流免疫層析
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操作簡單是側(cè)流層析方法除了穩(wěn)定和省時之外最重要的優(yōu)點。將樣品直接應(yīng)用于上樣區(qū)后，將HybriDetect放置在足夠體積的緩沖液中，幾秒鐘后，就可以看到金顆粒在整個分析膜上遷移。通常需要2到5分鐘，即可出現(xiàn)清晰的信號。Milenia HybriDetect試紙條也可直接放入樣品或含有樣品的緩沖液中。最終通過檢測線來判斷樣品的陽性或陰性信息。
Milenia HybriDetect是如何工作的？
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Milenia HybriDetect可用于檢測多種帶有特定標記的靶分子。不論是核酸擴增產(chǎn)物還是蛋白、抗體，只要帶有標記就可以使用HybriDetect試紙條來檢測，因此該試紙條的應(yīng)用場景是非常廣泛的。
圖1. Milenia HybriDetect的檢測原理
場景一：檢測擴增產(chǎn)物
HybriDetect通常用于DNA擴增產(chǎn)物的快速檢測。許多客戶會使用帶有Biotin、FITC/FAM修飾的引物，反應(yīng)產(chǎn)物包含這些標簽，從而可以在HybriDetect試紙條上被檢測到。如PCR和多種等溫擴增技術(shù)(如LAMP-LFA)均可以和HybriDetect一起應(yīng)用。此外，由于標記探針的特異性雜交，這種方法允許大量核酸(如核糖體RNA)的直接檢測（無需擴增）。
圖2. 標記引物合并到擴增產(chǎn)物中，該產(chǎn)物可在Milenia HybriDetect的測試線(T)上檢測到
場景二：檢測報告基因
報告基因需要包含相關(guān)標簽(Biotin、FITC/FAM)。在檢測過程中，該報告基因以某種方式降解。報告基因的狀態(tài)可以利用Milenia HybriDetect進行檢測。
圖3. 報告基因的檢測原理。雙標記報告基因在檢測反應(yīng)中被降解。降解程度的增加與c線強度的增加相關(guān)。
基于報告基因的檢測方法在分子生物學應(yīng)用中發(fā)揮著越來越大的作用。基于CRISPR/ CAS的分析(例如SHERLOCK或DETECTR)，利用HybriDetect，可以用于新型檢測方法的開發(fā)。
場景三. 非競爭性(免疫)分析
在下面的例子中，使用了一種具有完全不同生物成分的分析策略。Milenia HybriDetect適合作為發(fā)展個體抗體為基礎(chǔ)的快速檢測的通用平臺。針對不同表位的特異性抗體必須用生物素和FITC/FAM進行標記。這些一抗能夠結(jié)合靶標分子。
圖4. 非競爭性(免疫)分析，標記抗體能夠特異性結(jié)合靶標分子，這種“三明治”結(jié)構(gòu)可以HybriDetect試紙條上檢測到。
通過使用這種標記和檢測策略，已經(jīng)建立的免疫分析(如ELISA)可以很容易地轉(zhuǎn)化為側(cè)流層析檢測形式。
場景四. 競爭性（免疫）分析
在競爭性的LFAs中，信號的減弱或缺失與靶標分子的存在有關(guān)。檢測線強度的減弱表明陽性結(jié)果。測試強度不變代表陰性測試結(jié)果。下圖說明了使用Milenia HybriDetect進行競爭性檢測的原理。
圖5.競爭(免疫)分析法的原理。標記的靶標與未標記的靶標(在樣品中)競爭結(jié)合標記抗體。T線強度的降低與靶標分子的增加相關(guān)。
當然，HybriDetect試紙條作為一種通用型側(cè)流分析平臺，還有非常廣泛的應(yīng)用場景。目前已發(fā)表的超過250篇引用文獻，涉及藥物開發(fā)、獸醫(yī)、食品安全、農(nóng)業(yè)研究、分子診斷試劑盒等等多個領(lǐng)域。