久久久精品免费视频,三及精品视频,激情综合专区,亚洲色福利网站

歡迎蒞臨南京沃博生物科技有限公司官方網(wǎng)站!

干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染利器——jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染試劑

      干細(xì)胞被認(rèn)為是可用于建模和修復(fù)細(xì)胞功能的最強(qiáng)大和最靈活的細(xì)胞類(lèi)型。目前干細(xì)胞被廣泛用于藥物篩選、細(xì)胞治療、疾病建模、毒理學(xué)和基因組編輯研究,可以說(shuō)幾乎用于任何基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究領(lǐng)域。重要的是,其中許多技術(shù)依賴(lài)于將基因和/或蛋白質(zhì)成功引入干細(xì)胞,例如CRISPR/Cas9基因編輯。然而,干細(xì)胞,特別是多能干細(xì)胞(即能夠產(chǎn)生任何體細(xì)胞類(lèi)型的細(xì)胞)特別難以轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染干細(xì)胞時(shí)最大的挑戰(zhàn)是細(xì)胞死亡,這在非病毒和病毒轉(zhuǎn)染遞送方法之后都有報(bào)道。此外,由于對(duì)細(xì)胞死亡的易感性和快速自我更新,干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于其他細(xì)胞類(lèi)型。

     為了利用基于化學(xué)轉(zhuǎn)染進(jìn)行基因操作的優(yōu)勢(shì),理想的試劑需要實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率(在干細(xì)胞高于50%的情況下),同時(shí)最大限度地減少常見(jiàn)的干細(xì)胞細(xì)胞活力問(wèn)題。

     在此,本文報(bào)道了基于化學(xué)轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑jetOPTIMUS?在三種難轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率的表現(xiàn):間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)、小鼠胚胎干細(xì)胞(mESCs)和人類(lèi)誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(hiPSCs)。JetOPTIMUS?基于陽(yáng)離子聚合物,在各種原代細(xì)胞中達(dá)到DNA的高轉(zhuǎn)染效率,同時(shí)對(duì)細(xì)胞活率和形態(tài)的影響最小。此外,還評(píng)估了jetOPTIMUS對(duì)幾種市售和常用的培養(yǎng)物和底物系統(tǒng)上培養(yǎng)hPSCs的轉(zhuǎn)染效率。

 

結(jié)果與討論

1.jetOPTIMUS?確保原代間充質(zhì)干細(xì)胞在多次傳代時(shí)具有高轉(zhuǎn)染效率

 

1:在用jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時(shí)后,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析評(píng)估轉(zhuǎn)染效率,該質(zhì)粒在培養(yǎng)四個(gè)后續(xù)傳代的原代人間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSC)中。

 

2.jetOPTIMUS?在不影響小鼠胚胎干細(xì)胞生存能力的情況下實(shí)現(xiàn)了60%以上的轉(zhuǎn)染效率

 

2A:在原代mESCs中用jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時(shí)后,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。

2B:在原代mESCs中用jetOPTIMUS?轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時(shí)后,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估細(xì)胞活力。

 

3.jetOPTIMUS?在hiPSC中提供高達(dá)80%的轉(zhuǎn)染效率

 

3 A:用jetOPTIMUS?在hiPSC中轉(zhuǎn)染eGFP質(zhì)粒24小時(shí)后,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。

3B:用eGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24小時(shí)的hPSCs中的GFP表達(dá)和相應(yīng)的相位圖像。

 

4.評(píng)估jetOPTIMUS?搭配幾種hiPSC培養(yǎng)基和底物的轉(zhuǎn)染效率

 

1A:jetOPTIMUS?在用幾種商業(yè)干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的hiPSC中的轉(zhuǎn)染效率從最高到最低。

 

1B:jetOPTIMUS?在用幾種商業(yè)干細(xì)胞基質(zhì)培養(yǎng)的hiPSC中的轉(zhuǎn)染效率從最高到最低。

 

轉(zhuǎn)染方法:

     質(zhì)粒pCMV_eGFP_Luc(6.4kb)編碼具有巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)/螢光素酶的融合蛋白,購(gòu)自Clontech(#6169-1)。質(zhì)粒pEF1a_eGFP(4.9kb)編碼具有延伸因子-1α(EF1a)啟動(dòng)子的eGFP,購(gòu)自Ezyvec(#A626.1)。pCMV_eGFP_Luc用于轉(zhuǎn)染hMSC和mES,pEF1a_eGFP用于轉(zhuǎn)染hiPSC。

 

      轉(zhuǎn)染前72小時(shí),將hMSCs接種在24孔板中,每孔12000個(gè)細(xì)胞,接種在500μL相應(yīng)的細(xì)胞維持培養(yǎng)基中,并在37°C下用5%CO2孵育。對(duì)于mESCs,在轉(zhuǎn)染前24小時(shí),將細(xì)胞以每孔20000個(gè)細(xì)胞的速度接種在500μL mES培養(yǎng)基中的24孔板中,并在37°C下用5%CO2孵育。對(duì)于hiPSC,在轉(zhuǎn)染前24小時(shí),將細(xì)胞接種在涂有Corning?Matrigel?基質(zhì)的24孔板中,該基質(zhì)含有2 mL mTeSR培養(yǎng)基和10μM ROCK抑制劑,每孔10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,并在37°C和5%CO2下孵育。

 

      對(duì)于hMSCs和hiPCS,在轉(zhuǎn)染前30分鐘,移除培養(yǎng)基并用500μL的MSCBM代替?,不添加補(bǔ)充物,或分別用500μL含有10μM ROCK抑制劑的hiPSCs培養(yǎng)基,將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱。

相關(guān)產(chǎn)品:

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

101000051

jetOPTIMUs

0.1 ml

101000027

jetPRIME?

0.1 ml

101000036

INTERFERin?

0.1 ml

101000056

jetMESSENGER?

0.1 ml

101000010

PULSin?

0.4 ml

101000040

in vivo-jetPEI?

0.1 ml

101000122

In vivo-jetRNA?+ transfection reagent

1 mL

亚洲精品福利区| 91精品国产蜜臀色欲| 日韩AV强奸乱另类小说| av字幕综合| 日韩精品一笨道| 加勒比精品久久久久久| 免费福利视频日本| 精品人妻无码专区中文字幕_熟…| 人妻自宅内射| 久久人妻99| 91Chinese高清无码| 成人91AV在线观看| 1级香蕉黄色| 国产黄色录像视频| av无码极品人妻中文字幕| 精品久久青青| 久久久久黄色大片| 18网站免费在线| 人本在线不卡免费av| 少妇丝袜少妇影院| AV免费一区二区熟女电影| 精品亚洲一区二区三区四区京热| 日韩群女操逼| 扣B免费视频| 豆精品999| 超超一本适在线综合视频| 久久视频在线观看一区二区| 一区二区三区 夜夜夜| 欧美H免费在线| 国产精品欧美性爱在线| 亚洲精选一区| 色吊丝AV色吊丝免费| 久久久黄色9191| 精品国产久| 夜夜艹国产亚洲欧美黄爆艹| 大鸡巴干小骚逼ghk| 天天日日干干美女| 日韩无码欧美中文一区二区| 国产91精品成人网站| wu'ye电影一区| 成人色多观看在线|