磁珠分選- 方案A：MagniSort?陽性分選
引言
下述方案是MagniSort?陽性分選試劑盒的通用操作指南。具體請參見試劑盒內(nèi)的說明書。在陽性分選中，待分選的細胞首先與生物素標(biāo)記的抗體結(jié)合，然后被鏈酶親合素包被的磁珠捕獲。將細胞放入MagniSort?磁座后，陽性細胞被磁場吸住，而陰性細胞仍游離在溶液中，可被棄掉。每個試劑盒中的生物素化抗體和磁珠預(yù)先已滴定好最適濃度，為即用型試劑。
注意事項
注：MagniSort? 5mL磁座可產(chǎn)生強磁場。應(yīng)遠離心臟起搏器、信用卡、磁性身份卡、手表、計算機顯示器、硬盤等物品，以免損壞。
細胞制備
1. 在未特別說明的情況下，MagniSort?陽性分選試劑盒已優(yōu)化，適用于小鼠二級淋巴組織或正常人PBMC。
2. 用于小鼠細胞時，建議用40μm的尼龍細胞篩清除碎屑，以使試劑盒發(fā)揮出最佳效果。
3. 正常人PBMC的制備，參見“細胞制備-方案D：從全血中提取PBMC”（第28頁）。為使MagniSort?試劑盒發(fā)揮最佳性能，建議徹底洗滌白膜層，去除血小板。
4. 向緩沖液中加入EDTA減少細胞聚集。
后續(xù)用于無菌培養(yǎng)
1. MagniSort?陽性分選抗體和陽性分選磁珠中含有少量疊氮化鈉作為防腐劑。當(dāng)使用不含疊氮化鈉的無菌緩沖液時，它不會影響細胞功能。需要根據(jù)測試判斷在特定實驗中的性能。
2. 分選無菌細胞時應(yīng)該在超凈工作臺中進行，并使用帶蓋的聚苯乙烯無菌試管和無菌緩沖液。
提供的材料
? MagniSort?陽性分選抗體，200次試驗，20μL/次試驗。2-8°C貯存。
? MagniSort?陽性分選磁珠，4mL。2-8°C貯存。
所需其他材料
? 細胞分選推薦使用的緩沖液：添加3%胎牛血清（FBS）和10mM EDTA的PBS或Hank平衡鹽溶液（HBSS）。2-8°C貯存。
? MagniSort?磁座，5mL。
? 12 x 75 mm流式管(5 mL，BD Falcon?，貨號352008或類似產(chǎn)品)。
? 15mL離心管(BD Falcon?，貨號352099或類似產(chǎn)品)
實驗步驟
1. 用適當(dāng)?shù)募毎蛛x液，制備濃度為1x107細胞/100μL（1 x 108/mL）的淋巴細胞懸液。
注：細胞必須制成單細胞懸液。實驗前需要檢查樣本，必要時用渦旋法或移液器去除細胞團塊。
2. 將所需數(shù)量的細胞（不能超過2 x 108個細胞）放入12 x 75 mm的5mL試管中。
3. 每100μL細胞中加入20μLMagniSort?陽性分選抗體。渦旋5次混勻。室溫孵育10分鐘。
4. 加入細胞分離液洗滌細胞，使其總體積達到4mL，在300xg下離心5分鐘。
5. 棄上清，然后用細胞分離液完全重懸細胞至最初的體積。
注：細胞必須制成單細胞懸液，實驗前需要檢查樣本，必要時用渦旋或移液器去除細胞團塊。
6. 每100μL細胞中加入20μLMagniSort?陽性分選磁珠。渦旋5次混勻。室溫孵育10分鐘。
注：為確保最佳性能，將MagniSort?陽性分選磁珠加入細胞之前必須充分混勻。將設(shè)定為1mL的Pipetman? P1000移液器上下吹打5次，或者采用渦旋的方式完全重懸磁珠。7. 用細胞分離液將體積加至2.5mL。將設(shè)定為1mL的Pipetman?P1000移液器上下吹打3次，使其混勻。不能渦旋。
8. 將試管完全插入磁座中間的孔底，室溫孵育5分鐘。
9. 拿起磁座將試管內(nèi)的上清液倒入廢液容器內(nèi)；這些是不需要（未結(jié)合）的細胞。將試管倒置1秒鐘，然后回正。注：切勿吸干或搖晃倒置后的試管，否則會降低回收率。如果需要也可以收集起結(jié)合細胞。
10. 從磁座中取出試管并重復(fù)7-9步兩次，總共洗滌細胞3次。
11. 從磁座中取出含目標(biāo)細胞的試管，加入1mL細胞分離液。沿著試管側(cè)壁加入緩沖液，洗滌試管側(cè)壁。此時，試管內(nèi)就是分選的陽性細胞，備用。
磁珠分選 -方案B：MagniSort?陰性分選
簡介
以下是MagniSort?陰選試劑盒的通用操作指南，該試劑盒適用于細胞進行陰性分選。具體請參見每個試劑盒內(nèi)的說明書。在陰性分選中，不需要的細胞與生物素化抗體混合液結(jié)合，然后加入鏈霉親和素包被的磁珠。將細胞放入MagniSort?磁座后，不需要的細胞被磁場吸住，而需要的細胞游離在溶液中，將其倒出后即可使用。每個試劑盒中的生物素化抗體和磁珠已預(yù)先滴定好最適濃度，為即用型試劑。
注意事項
注意：MagniSort? 5mL磁座可產(chǎn)生強磁場。應(yīng)遠離心臟起搏器、信用卡、磁性身份卡、手表、計算機顯示器、硬盤等物品，以免損壞。
細胞制備
1. 在未特別指明的情況下，MagniSort? 陰選試劑盒已經(jīng)過優(yōu)化，專門適用于小鼠二級淋巴組織或正常人PBMC。
2. 用于小鼠細胞時，建議用40μm的尼龍細胞篩清除碎屑，以使試劑盒發(fā)揮出最佳效果。
3. 正常人PBMC的制備，參見“細胞制備-方案D：從全血中提取PBMC”（第28頁）。為使MagniSort?試劑盒發(fā)揮最佳性能，建議徹底洗滌白膜層，去除血小板。
4. 緩沖液中加入EDTA減少細胞聚集。
后續(xù)用于無菌培養(yǎng)
1. MagniSort?陰選抗體混合液和陰性分選磁珠中含有少量疊氮化鈉作為防腐劑。當(dāng)使用不含疊氮化鈉的無菌緩沖液時，它不會影響細胞功能。需要根據(jù)測試判斷在特定實驗中的性能。
2. 分選無菌細胞時應(yīng)該在超凈工作臺中進行，并使用帶蓋的聚苯乙烯無菌試管和無菌緩沖液。
提供的材料
? MagniSort?陰選抗體混合液，200次實驗，20μL/次試驗。2-8°C貯存。
? MagniSort?陰性分選磁珠，4mL。2-8°C貯存。
所需其他材料
? 細胞分選推薦使用的緩沖液：PBS或添加3%FBS和10mM EDTA的HBSS。2-8°C貯存。
? MagniSort?磁座，5mL
? 12 x 75 mm流式管(5 mL, BD Falcon?, 貨號352008或類似產(chǎn)品)
實驗步驟
1. 用適當(dāng)?shù)募毎蛛x液，制備濃度為1x107細胞/100μL（1 x 108/mL）的單細胞懸液。
注：細胞必須制成單細胞懸液。實驗前需要檢查樣本，必要時用渦旋法或移液器去除細胞團塊。
2. 將所需數(shù)量的細胞（不能超過2 x 108個細胞）放入12 x 75 mm的5mL試管中。
3. 每100μL細胞中加入20μLMagniSort?陰選抗體混合液。渦旋5次混勻。室溫孵育10分鐘。
4. 用細胞分離液洗滌細胞，使其總體積達到4mL，300xg離心5分鐘。
5. 棄上清，然后用細胞分離液完全重懸細胞至最初的體積。
注：細胞必須制成單細胞懸液。實驗前需要檢查樣本，必要時用渦旋法或移液器去除細胞團塊。
6. 向每100μL細胞中加入20μL MagniSort?陰性分選磁珠。渦旋5次混勻。室溫孵育5分鐘。
注：為確保最佳性能，將MagniSort?陰性分選磁珠加入細胞之前必須充分混勻。將設(shè)定為1mL的Pipetman? P1000移液器上下吹打5次，完全重懸磁珠，不能渦旋。
7. 用細胞分離液將體積加至2.5mL。將設(shè)定為1mL的Pipetman?P1000移液器上下吹打3次，使其混勻。不能渦旋。
8. 將試管插入磁座中間的孔底，室溫孵育5分鐘。
9. 拿起磁座以連續(xù)的動作將試管內(nèi)的上清液倒入一支新的12x75 mm 5mL試管中并將磁座內(nèi)的試管倒置1秒鐘，然后回正。
注：切勿吸干或搖晃倒置后的試管，否則會降低未結(jié)合細胞的純度。
10. 將磁座中的試管丟棄。
11. 此時，新5mL 12 x 75 mm試管中的陰性細胞即為分選后的目的細胞，備用。
相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
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MAG-4902-10 |
5 mL |
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8802-6833-74 |
200 tests |
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MSNB-6002-71 |
25 tests |
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MSNB-6002-74 |
200 tests |
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8804-6810-74 |
200 tests |
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8802-6831-74 |
200 tests |
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8804-6867-74 |
200 tests |
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MSPB-6003-71 |
25 tests |
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MSPB-6003-74 |
200 tests |
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8804-6829-74 |
200 tests |
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8804-6821-74 |
200 tests |
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8804-6837-74 |
200 tests |
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8802-6861-74 |
200 tests |
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8802-6842-74 |
200 tests |
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8802-6841-74 |
200 tests |
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8802-6832-74 |
200 tests |
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8804-6820-74 |
200 tests |
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8802-6849-74 |
200 tests |
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8802-6848-74 |
200 tests |
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8802-6863-74 |
200 tests |
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8802-6817-74 |
200 tests |
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8804-6816-74 |
200 tests |
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8804-6815-74 |
200 tests |
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8804-6864-74 |
200 tests |
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8804-6827-74 |
200 tests |
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8804-6828-74 |
200 tests |
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8804-6819-74 |
200 tests |
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8804-6802-74 |
200 tests |
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8804-6822-74 |
200 tests |
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8804-6836-74 |
200 tests |
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8802-6860-74 |
200 tests |
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8802-6840-74 |
200 tests |
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8802-6830-74 |
200 tests |
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8802-6835-74 |
200 tests |
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8802-6847-74 |
200 tests |
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8802-6865-74 |
200 tests |
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8802-6834-74 |
200 tests |
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8802-6862-74 |
200 tests |
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8804-6824-74 |
200 tests |
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8804-6825-74 |
200 tests |
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8802-6843-74 |
200 tests |
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8802-6844-74 |
200 tests |
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8804-6812-74 |
200 tests |
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8804-6811-74 |
200 tests |
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8802-6846-74 |
200 tests |
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8804-6814-74 |
200 tests |
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8804-6813-74 |
200 tests |
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8802-6838-74 |
200 tests |
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8802-6870-74 |
200 tests |
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