簡單免洗檢測，可同時監(jiān)測3種耐藥性相關(guān)的ABC轉(zhuǎn)運蛋白耐藥性是一種因ATP結(jié)合盒式（ATP Binding Cassette，ABC）膜轉(zhuǎn)運蛋白家族上調(diào)介導(dǎo)所產(chǎn)生的現(xiàn)象。ABC轉(zhuǎn)運蛋白的過度表達了加速有毒物質(zhì)從細胞中的去除，例如化療劑從腫瘤細胞中排出，或抗生素從耐藥菌株中排出。Enzo的EFLUXX-ID? 多藥耐藥性檢測試劑盒可實現(xiàn)同時對三種臨床相關(guān)的 ABC 轉(zhuǎn)運蛋白的功能檢測：包括MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2 和 BCRP。
◆特點
● 簡單免洗的操作步驟，結(jié)果可在1小時內(nèi)獲得
● 可檢測與3種ABC轉(zhuǎn)運蛋白（MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP）活性相關(guān)的耐藥性
● 通過單一專用染料可定量檢測活細胞中的多藥耐藥性（MDR）活性，并以MDR 活性因子（MAF）表征
● 試劑盒內(nèi)含有三種已知的MDR1（p-糖蛋白）、MRP1/2和BCRP蛋白特異性抑制劑
● 可檢測Calcein AM染料無法檢測的BCRP蛋白活性
● 有綠色、金色兩種熒光染料可供選擇
● 兩種染料均可與表達GFP的細胞系或其他CELLESTIAL? 染料同時使用
◆作用機制
EFLUXX-ID?使用了一種疏水性非熒光化合物，這種化合物容易穿透細胞膜，經(jīng)細胞內(nèi)酯酶水解成親水性熒光染料。除非EFLUXX-ID? 染料被泵出至細胞外，否則酯酶裂解的染料會一直存在于細胞內(nèi)。因此，表現(xiàn)出耐藥性的細胞將染料主動運輸泵出胞外，會出現(xiàn)熒光減弱的現(xiàn)象。EFLUXX-ID? 檢測是目前少有可同時監(jiān)測三種主要的ABC轉(zhuǎn)運蛋白并能夠分析單泵活性的試劑盒。
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熒光團 |
兼容的EFLUXX-ID? 試劑 |
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Cy 3 & Cy 5的偶聯(lián)物、Pl、7-AAD、APC、Texas Red、RFP、YFP、TAMRA、UV和Violet 染料 |
EFLUXX-ID? 綠色熒光染料 |
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GFP/eGFP、RFP、PI、7-AAD、APC、Cy 5的偶聯(lián)物、Rhodamine 123、Texas Red、UV和Violet 染料 |
EFLUXX-ID? 金色熒光染料 |
表1：EFLUXX-ID? 多藥耐藥性染料與其他熒光染料的兼容性
圖1：對三種主要ABC轉(zhuǎn)運蛋白的活性進行檢測。使用EFLUXX -ID Green（上）、Gold（中）或Calcein AM（下）染料，通過流式細胞術(shù)評估CHO K1細胞中ABC轉(zhuǎn)運蛋白的活性。與未處理的細胞相比，用ABC轉(zhuǎn)運蛋白特異性抑制劑（圖中陰影部分）處理可誘導(dǎo)染料保留在細胞內(nèi)（圖中實線部分）。平均熒光強度（MFI）的差異表明了對應(yīng)蛋白的活性，在圖中通過多藥耐藥性活性因子值（MAF）進行表征。更高的MAF值表明EFLUXX-ID染料對抑制劑有著良好的特異性。而Calcein AM染料的低MAF值表明其（常用的MDR檢測探針）無法檢測BCRP活性。
圖2：使用EFLUXX-ID? Green和EFLUXX-ID? Gold染料在CHO K1細胞中評估已知抑制劑對ABC轉(zhuǎn)運蛋白活性的結(jié)果分析。將細胞與試劑盒中含有的MDR普通抑制劑（左一）、轉(zhuǎn)運蛋白特異性抑制劑在37°C下孵育5 min。隨后在37°C下用指定的染料染色細胞30 min，并立即利用流式細胞術(shù)進行分析。所用抑制劑：5 μM環(huán)胞霉素 A（MDR普通抑制劑）、20 μM維拉帕米（P-gp特異性抑制劑）、0.05 mM MK-571（MRP特異性抑制劑）、0.05 mM新生霉素（BCRP特異性抑制劑）。
圖3：EFLUXX-ID? Green 490/514 nm ex/em和Gold 530/570 nm ex/em 試劑的光譜特性可與其他常見的熒光染料進行多重檢測。
產(chǎn)品詳情
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應(yīng)用 |
流式細胞術(shù)，熒光顯微鏡 |
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應(yīng)用說明 |
EFLUXX-ID? 多藥耐藥性檢測試劑盒可對活細胞（懸浮細胞和貼壁細胞）中的耐藥表型進行檢測和分析。 |
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品質(zhì)保證 |
每批次EFLUXX-ID? Gold耐藥檢測試劑盒的樣品試劑盒均已按照操作手冊中的步驟，對第5代和第20代間的 CHO K1細胞系進行染色。獲得的結(jié)果如下： 1. 維拉帕米介導(dǎo)的抑制后MAF>80 2. MK-571介導(dǎo)的抑制后MAF>60 3. 新生霉素介導(dǎo)的抑制后MAF>40 |
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包裝 |
100 assays（流式細胞術(shù)） |
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使用/穩(wěn)定性 |
自交貨后，試劑盒組分在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下可穩(wěn)定保存一年。 |
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儲存條件 |
避光。避免反復(fù)凍融。 |
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運輸條件 |
藍冰運輸 |
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短期儲存 |
-20°C |
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長期儲存 |
-80°C |
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組分 |
2 瓶，EFLUXX-ID? Gold或EFLUXX-ID? Green檢測試劑 300 nmoles，MDR1 抑制劑（維拉帕米） 750 nmoles，MRP 抑制劑（MK-571） 1.5 μmoles，BCRP 抑制劑（新生霉素） 500 μL，碘化丙啶 |
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科學(xué)背景 |
耐藥性是一種由跨膜ATP結(jié)合盒（ATP Binding Cassette ，簡稱ABC）轉(zhuǎn)運蛋白家族上調(diào)介導(dǎo)的現(xiàn)象。 ABC轉(zhuǎn)運蛋白的過表達加速了毒性劑從細胞中去除，例如化療劑從腫瘤細胞中流出，或抗生素從耐藥菌株中流出。 |
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監(jiān)管狀態(tài) |
RUO - 僅供研究用 |
相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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ENZ-51029-K100 |
EFLUXX-ID? Green multidrug resistance assay kit藥檢測試劑盒（綠色熒光） |
1 Kit |
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ENZ-51030-K100 |
EFLUXX-ID? Gold multidrug resistance assay kit EFLUXX-ID? 耐藥檢測試劑盒（金色熒光） |
1 Kit |
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