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染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱ChIP）——ChIP-IT? Express 染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱ChIP）是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的一種技術(shù)。其原理是：在生理狀態(tài)下用甲醛把細(xì)胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起，通過(guò)超聲或酶處理將染色質(zhì)切為均一的小片段后，利用抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)，使用DNA結(jié)合蛋白特異性的抗體將目的蛋白和DNA復(fù)合物沉淀下來(lái)。復(fù)合物經(jīng)過(guò)洗滌，解交聯(lián)，蛋白酶K消化去除DNA結(jié)合蛋白，經(jīng)純化得到感興趣的DNA片段。純化的DNA片段可用于后續(xù)的分析，比如qPCR，測(cè)序，ChIP-chip，ChIP re ChIP等。
Active motif公司的ChIP-IT? Express試劑盒使用protein G包被的磁珠，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的瓊脂糖珠，使得ChIP實(shí)驗(yàn)可以在1天之內(nèi)完成。試劑盒可以使用超聲法或酶切法進(jìn)行染色質(zhì)的斷裂處理。每種方法都提供快速、可重復(fù)的操作步驟，省時(shí)省力，實(shí)驗(yàn)者更容易獲得成功的ChIP結(jié)果。
圖1 ChIP-IT? Express試劑盒的操作流程
ChIP-IT? Express試劑盒的優(yōu)點(diǎn)
● 組分完整——提供ChIP實(shí)驗(yàn)所需的所有試劑；
● 可用于檢測(cè)蛋白/DNA的相互作用，不僅僅限于組蛋白的修飾；
● 與全基因組分析或PCR相關(guān)的方法兼容；
● 無(wú)需進(jìn)行試劑和操作步驟的優(yōu)化；
● 無(wú)需酚/氯仿抽提步驟——試劑盒包含DNA純化柱，可對(duì)DNA進(jìn)行快速純化
傳統(tǒng)的ChIP實(shí)驗(yàn)都是使用染色質(zhì)組成相關(guān)的抗體，如乙?；M蛋白抗體。然而對(duì)于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性分析而言，這無(wú)法揭示出是哪種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到我們感興趣的啟動(dòng)子上。相比之下，使用轉(zhuǎn)錄因子特異性抗體，能夠直接監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子和DNA的相互作用，但是這種技術(shù)與傳統(tǒng)的ChIP相比具有更大的挑戰(zhàn)，需要準(zhǔn)備多種復(fù)雜的緩沖液，抑制劑混合物和封閉試劑等。而且在缺少抗體、對(duì)照和驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)流程下，很難對(duì)ChIP結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。為了解決這些問(wèn)題，使得ChIP實(shí)驗(yàn)同時(shí)適用于轉(zhuǎn)錄因子和組蛋白，Active motif公司的ChIP-IT? Express試劑盒提供ChIP實(shí)驗(yàn)所需的所有試劑，包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，使得研究者更容易成功的操作ChIP。
圖2: 改良的ChIP(使用ChIP-IT Express試劑盒)
PCR分析ChIP后的DNA。典型的ChIP實(shí)驗(yàn)每次需要2000,000個(gè)細(xì)胞，使用ChIP-IT Express試劑盒，僅需要100,000或更少的細(xì)胞既可獲得陽(yáng)性的ChIP結(jié)果。
用1%的甲醛固定Hela細(xì)胞10分鐘，使用超聲法破碎染色質(zhì)，使用陰性對(duì)照IgG和RNA pol II抗體，對(duì)不同細(xì)胞數(shù)量來(lái)源（100,000到750,000個(gè)細(xì)胞）的染色質(zhì)進(jìn)行ChIP，重復(fù)2次。使用陽(yáng)性對(duì)照引物GAPDH對(duì)ChIP后的DNA進(jìn)行36個(gè)循環(huán)的PCR分析（抗體和引物包含在人ChIP-IT對(duì)照試劑盒里，Active motif也可以提供小鼠和大鼠對(duì)照試劑盒）。取10ul PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%凝膠電泳，EB染色后紫外觀察。結(jié)果顯示與使用陰性對(duì)照IgG相比，使用RNA pol II抗體的ChIP大量富集了GAPDH啟動(dòng)子區(qū)域的DNA序列。
相關(guān)產(chǎn)品信息
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供貨商 |
產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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Active Motif |
53008 |
ChIP-IT? Express |
25 rxns |
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Active Motif |
53009 |
ChIP-IT? Express Enzymatic |
25 rxns |
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供貨商 |
產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品說(shuō)明 |
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Active Motif |
53014 |
ChIP-IT? Protein G Magnetic Beads |
25 rxns |
Protein G包被的磁珠 |
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Active Motif |
53016 |
Re-ChIP-IT? |
25 rxns |
雙重ChIP |
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Active Motif |
53018 |
ChIP-IT? Express HT |
96 rxns |
高通量ChIP,一次可同時(shí)使用96分樣本 |
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Active Motif |
53019 |
Ready-to-ChIP Hep G2 Chromatin |
10 rxns |
即用型的ChIP實(shí)驗(yàn)用染色質(zhì) |
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Active Motif |
53020 |
Ready-to-ChIP K-562 Chromatin |
10 rxns |
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Active Motif |
53021 |
Ready-to-ChIP NIH/3T3 Chromatin |
10 rxns |
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Active Motif |
53015 |
Ready-to-ChIP HeLa Chromatin |
10 rxns |
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Active Motif |
53026 |
ChIP-IT? Control qPCR Kit – Human |
5 rxns |
ChIP對(duì)照試劑盒，包含陰性對(duì)照IgG和陽(yáng)性對(duì)照 |
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RNA pol II抗體和PCR引物 |
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Active Motif |
53027 |
ChIP-IT? Control qPCR Kit – Mouse |
5 rxns |
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Active Motif |
53028 |
ChIP-IT? Control qPCR Kit – Rat |
5 rxns |
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Active Motif |
53010 |
ChIP-IT? Control Kit – Human |
5 rxns |
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Active Motif |
53011 |
ChIP-IT? Control Kit – Mouse |
5 rxns |
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Active Motif |
53012 |
ChIP-IT? Control Kit – Rat |
5 rxns |
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Active Motif |
53032 |
ChIP-IT? Express Shearing Kit |
10 rxns |
超聲法染色質(zhì)處理試劑盒 |
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Active Motif |
53035 |
ChIP-IT? Express Enzymatic Shearing Kit |
10 rxns |
酶切法染色質(zhì)處理試劑盒 |
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Active Motif |
53040 |
ChIP-IT? High Sensitivity |
16 rxns |
高靈敏ChIP試劑盒，適用于低豐度轉(zhuǎn)錄因子、 |
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低親和力抗體或有限的樣本 |
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Active Motif |
53041 |
ChIP-IT? ChIP-Seq |
10 libraries |
ChIP-Seq劑盒 |
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Active Motif |
53045 |
ChIP-IT? FFPE |
16 rxns |
適用于福爾馬林固定，石蠟包埋組織樣本的ChIP |
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Active Motif |
53042 |
ChIP-IT? PBMC |
16 rxns |
適用于外周血單核細(xì)胞的ChIP |
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Active Motif |
53024 |
RNA ChIP-IT? |
25 rxns |
用于研究RNA與細(xì)胞核染色質(zhì)的相互作用 |
QQ：1076801270 QQ:3570688425
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