溶酶體
溶酶體為單層膜蛋白包圍的內(nèi)含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶，如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等，是物質(zhì)代謝的場所。
弱堿性胺選擇性聚集在胞內(nèi)低pH值的小室中，可用于研究溶酶體的生物合成和發(fā)病機理。其中最常用的就是DAMP，它不發(fā)熒光，需要和抗DNP的抗體共同使用，來觀察染色模式。中性紅、吖啶橙等熒光探針也常用于酸性細胞器的染色，不過它們?nèi)狈μ禺愋浴?span>
LysoTracker探針就是Invitrogen開發(fā)的向酸性熒光探針，用于標記和追蹤活細胞中的酸性細胞器。這些探針有幾個重要的特征：對酸性細胞器的高選擇性，在納摩爾濃度下能對活細胞有效標記。而且，LysoTracker探針有幾種不同的顏色，適合多色標記。
LysoTracker探針是細胞膜通透性的，一般聚集在球形的細胞器中。研究人員發(fā)現(xiàn)探針在極低濃度（～50 nM）下選擇性最佳。此外，較大的酸性細胞器在LysoTracker Red DND-99染色后，經(jīng)過甲醛固定仍保留其染色模式。
對于那些想研究溶酶體生物發(fā)生動力學(xué)的研究人員來說，LysoSensor探針可謂量身定做。LysoSensor染料是向酸性的探針，由于質(zhì)子化作用聚集在酸性細胞器中。質(zhì)子化也緩解了染料的熒光淬滅，使熒光強度增加。因此，LysoSensor在酸化的環(huán)境中表現(xiàn)出pH依賴的熒光強度增加，而LysoTracker探針的熒光則沒有明顯變化。
Invitrogen提供了5種LysoSensor試劑，pKa不同，顏色各異。LysoSensor Blue DND-167和LysoSensor Green DND-189的pKa值很低，處于酸性環(huán)境中才會發(fā)出熒光，而LysoSensor Green DND-153在中性pH下就發(fā)出很強的熒光。LysoSensor Yellow/Blue DND-160很特別，具有雙激發(fā)和雙發(fā)射峰，是pH依賴的。在酸性細胞器中，它主要發(fā)黃色熒光，而在弱酸性細胞器中，熒光則為藍色。LysoSensor Yellow/Blue DND-160曾與fluo-3 AM共用，來同時測量兔胃腺中H+ 和Ca2+，以確定類膽堿和cAMP依賴通路激活后胃酸分泌的動力學(xué)。
除了上面這些傳統(tǒng)的熒光探針，Invitrogen的Organelle Lights?熒光蛋白也是一個不錯的選擇。Organelle Lights是即用型的熒光蛋白載體，融合了信號肽，能將表達的熒光蛋白定位到亞細胞器中，如核、質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和過氧化物酶體等等。顏色有青、綠、橙、紅幾種。它通過改造的可用于哺乳動物細胞的桿狀病毒（BacMam virus）將熒光蛋白導(dǎo)入胞內(nèi)，不僅安全，而且適合多種細胞類型，包括原代細胞和神經(jīng)細胞。你只需要將試劑加到細胞中就行了，既不需要轉(zhuǎn)染，也不需要對細胞做任何處理，用起來相當方便。
相關(guān)產(chǎn)品：
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warbio貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
Ex/Em |
樣本類型 |
重要特性 |
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LX3032 |
LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針 |
73/422 |
活細胞 |
可被活細胞極快速地吸收；加入染料后 1 至 5 分鐘即可達到最佳成像效果 |
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LX4032 |
LysoTracker Red DND-99 溶酶體紅色熒光探針 |
577/590 |
活細胞 |
染料可快速導(dǎo)入，只需納摩爾級濃度，對酸性細胞器具有高選擇性，幾乎不對線粒體染色，可用于活細胞中酸性細胞器的標記和追蹤 |
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LX3232 |
LysoSensor Green DND-189溶酶體綠色熒光探針 |
443/505 |
活細胞 |
通過質(zhì)子化作用在酸性細胞器內(nèi)累積，質(zhì)子化作用還可解除染料的熒光淬滅性 |
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LX4232 |
LysoSensor Yellow/Blue DND-160 溶酶體黃/藍色熒光探針 |
329/440 |
活細胞 |
LysoSensor?染料為活細胞染料，在pH7 時無熒光，酸化后，熒光強度的增加具有 pH依賴性 |
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LX5232 |
LysoSensor? Blue DND-167溶酶體藍色熒光探針 |
373/425 |
活細胞 |
LysoSensor?染料為活細胞染料，在pH7 時無熒光，酸化后，熒光強度的增加具有 pH依賴性 |
注：探針標記細胞后，只能用熒光顯微鏡觀察，而不能用流式或熒光酶標儀檢測，因為在總細胞熒光中溶酶體熒光只占非常小的比例。