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溶酶體熒光探針—專題

溶酶體

溶酶體為單層膜蛋白包圍的內(nèi)含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶,如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等,是物質(zhì)代謝的場所。

弱堿性胺選擇性聚集在胞內(nèi)低pH值的小室中,可用于研究溶酶體的生物合成和發(fā)病機理。其中最常用的就是DAMP,它不發(fā)熒光,需要和抗DNP的抗體共同使用,來觀察染色模式。中性紅、吖啶橙等熒光探針也常用于酸性細(xì)胞器的染色,不過它們?nèi)狈μ禺愋浴?span>

LysoTracker探針就是Invitrogen開發(fā)的向酸性熒光探針,用于標(biāo)記和追蹤活細(xì)胞中的酸性細(xì)胞器。這些探針有幾個重要的特征:對酸性細(xì)胞器的高選擇性,在納摩爾濃度下能對活細(xì)胞有效標(biāo)記。而且,LysoTracker探針有幾種不同的顏色,適合多色標(biāo)記。

LysoTracker探針是細(xì)胞膜通透性的,一般聚集在球形的細(xì)胞器中。研究人員發(fā)現(xiàn)探針在極低濃度(~50 nM)下選擇性最佳。此外,較大的酸性細(xì)胞器在LysoTracker Red DND-99染色后,經(jīng)過甲醛固定仍保留其染色模式。

對于那些想研究溶酶體生物發(fā)生動力學(xué)的研究人員來說,LysoSensor探針可謂量身定做。LysoSensor染料是向酸性的探針,由于質(zhì)子化作用聚集在酸性細(xì)胞器中。質(zhì)子化也緩解了染料的熒光淬滅,使熒光強度增加。因此,LysoSensor在酸化的環(huán)境中表現(xiàn)出pH依賴的熒光強度增加,而LysoTracker探針的熒光則沒有明顯變化。

Invitrogen提供了5LysoSensor試劑,pKa不同,顏色各異。LysoSensor Blue DND-167LysoSensor Green DND-189pKa值很低,處于酸性環(huán)境中才會發(fā)出熒光,而LysoSensor Green DND-153在中性pH下就發(fā)出很強的熒光。LysoSensor Yellow/Blue DND-160很特別,具有雙激發(fā)和雙發(fā)射峰,是pH依賴的。在酸性細(xì)胞器中,它主要發(fā)黃色熒光,而在弱酸性細(xì)胞器中,熒光則為藍(lán)色。LysoSensor Yellow/Blue DND-160曾與fluo-3 AM共用,來同時測量兔胃腺中H+ Ca2+,以確定類膽堿和cAMP依賴通路激活后胃酸分泌的動力學(xué)。

除了上面這些傳統(tǒng)的熒光探針,InvitrogenOrganelle Lights?熒光蛋白也是一個不錯的選擇。Organelle Lights是即用型的熒光蛋白載體,融合了信號肽,能將表達的熒光蛋白定位到亞細(xì)胞器中,如核、質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和過氧化物酶體等等。顏色有青、綠、橙、紅幾種。它通過改造的可用于哺乳動物細(xì)胞的桿狀病毒(BacMam virus)將熒光蛋白導(dǎo)入胞內(nèi),不僅安全,而且適合多種細(xì)胞類型,包括原代細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。你只需要將試劑加到細(xì)胞中就行了,既不需要轉(zhuǎn)染,也不需要對細(xì)胞做任何處理,用起來相當(dāng)方便。

相關(guān)產(chǎn)品:

warbio貨號

產(chǎn)品名稱

Ex/Em

 樣本類型

重要特性

LX3032

LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針

73/422

活細(xì)胞

可被活細(xì)胞極快速地吸收;加入染料后 1 5 分鐘即可達到最佳成像效果

LX4032

LysoTracker Red DND-99 溶酶體紅色熒光探針

577/590

活細(xì)胞

染料可快速導(dǎo)入,只需納摩爾級濃度,對酸性細(xì)胞器具有高選擇性,幾乎不對線粒體染色,可用于活細(xì)胞中酸性細(xì)胞器的標(biāo)記和追蹤

LX3232

LysoSensor Green DND-189溶酶體綠色熒光探針

443/505

活細(xì)胞

通過質(zhì)子化作用在酸性細(xì)胞器內(nèi)累積,質(zhì)子化作用還可解除染料的熒光淬滅性

LX4232

LysoSensor Yellow/Blue DND-160 溶酶體黃/藍(lán)色熒光探針

329/440

活細(xì)胞

LysoSensor?染料為活細(xì)胞染料,在pH7 時無熒光,酸化后,熒光強度的增加具有 pH依賴性

LX5232

LysoSensor? Blue DND-167溶酶體藍(lán)色熒光探針

373/425

活細(xì)胞

LysoSensor?染料為活細(xì)胞染料,在pH7 時無熒光,酸化后,熒光強度的增加具有 pH依賴性

注:探針標(biāo)記細(xì)胞后,只能用熒光顯微鏡觀察,而不能用流式或熒光酶標(biāo)儀檢測,因為在總細(xì)胞熒光中溶酶體熒光只占非常小的比例


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