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糜蛋白酶檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/96S)

貨號(hào) SH0594 售價(jià)(元) 1440
規(guī)格 100T/96S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

SH0594

糜蛋白酶(Chymotrypsin)檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/96S)

 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

糜蛋白酶,又稱(chēng)胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一種蛋白水解酶,能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似,但是具有分解能力強(qiáng)、毒性低和不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化,對(duì)膿性和非膿性痰液均有效;也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合,如白內(nèi)障摘除。

測(cè)定原理:

糜蛋白酶催化ATEE水解,產(chǎn)物在237 nm有特征光吸收;通過(guò)測(cè)定237 nm 光吸收增加速率,來(lái)計(jì)算糜蛋白酶活性。

組成:

產(chǎn)品名稱(chēng)

SH0594-100T/96S

Storage

試劑一:液體

100ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃避光

說(shuō)明書(shū)

一份

 

試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入20 ml蒸餾水充分溶解。

自備儀器和用品:

臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV)、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。

測(cè)定步驟:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到237 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37℃水浴中保溫30min。

3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μl試劑一,200μl試劑二,混勻于237nm測(cè)定4min內(nèi)吸光值變化,記為△A空白管。(從吸光值穩(wěn)定增加開(kāi)始計(jì)時(shí))

4. 測(cè)定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μl粗酶液,200μl試劑二,混勻于237nm測(cè)定4min內(nèi)吸光值變化,記為△A測(cè)定管。(從吸光值穩(wěn)定增加開(kāi)始計(jì)時(shí))

注意:空白管只需要測(cè)定一次。

糜蛋白酶活性計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1)按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃每毫克蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。

糜蛋白酶(U/mg prot= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V1)÷T

=2.75×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃每克樣品每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。

糜蛋白酶(U/g 鮮重)=(△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷(W×V1÷V2)÷T

=2.75×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷W

W:樣品質(zhì)量(g);Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測(cè)定;V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),20μl=2×10-2 mlV2:粗酶液總體積(ml),1 ml;V反總:反應(yīng)總體積,220μl=0.22ml; T:反應(yīng)時(shí)間(min),4min。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1)按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃每毫克蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位

糜蛋白酶(U/mg prot= (△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V1)÷T

=2.75×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃每克樣品每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。

糜蛋白酶(U/g 鮮重)=(△A測(cè)定管-△A空白管) ×V反總÷(W×V1÷V2)÷T

=2.75×(△A測(cè)定管-△A空白管)÷W

W:樣品質(zhì)量(g);Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測(cè)定;V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),20μl=2×10-2 ml;V2:粗酶液總體積(ml),1 ml;V反總:反應(yīng)總體積,220μl=0.22ml T:反應(yīng)時(shí)間(min),4min

注意事項(xiàng):

臨用前配制的試劑配置好后3天內(nèi)使用完畢。