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L-半乳糖苷-1.4-內(nèi)酯脫氫酶（Gal LDH）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0554 | 售價(jià)（元） | 2880 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0554 |
L-半乳糖苷-1.4-內(nèi)酯脫氫酶（Gal LDH）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內(nèi)膜，負(fù)責(zé)催化植物體內(nèi)AsA生物合成的最后一步，也是該途徑的關(guān)鍵酶之一，對(duì)植物體內(nèi)AsA含量的積累起著至關(guān)重要的作用。
測(cè)定原理：
Gal LDH催化L-半乳糖內(nèi)酯還原細(xì)胞色素C(Cyt c)，還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測(cè)定還原型Cyt c增加速率，來(lái)計(jì)算Gal LDH活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0554-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1管 |
4℃ |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入16ml蒸餾水，充分溶解。
試劑三：粉劑×1管，4℃保存。臨用前加入2ml蒸餾水，充分溶解。
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
Gal LDH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到550nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3.依次在、微量玻璃比色皿/96孔板中加入20μl上清液、160μl預(yù)熱的試劑二和20μl試劑三，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值A1和A2，△A = A2﹣A1。
Gal LDH活性計(jì)算公式：
使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原1nmol Cyt c 為1個(gè)酶活單位。
Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（Cpr×V樣）÷T
=578×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘還原1nmol Cyt c 為1個(gè)酶活單位。
Gal LDH (nmol/min/g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=578×△A ÷W
ε：還原型Cyt c摩爾消光系數(shù)，17.3×103L/ mol/cm；d：96孔板光徑(cm)，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=0.0002 L；109：1mol=1×109nmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；T：反應(yīng)時(shí)間，2min。
注意事項(xiàng):
試劑二和試劑三配制好后3天內(nèi)使用完。