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脂肪酶（LPS）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0463 | 售價(jià)（元） | 780 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0463 |
脂肪酶（LPS）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見(jiàn)于胰腺炎和胰腺癌。
測(cè)定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0463-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
65ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑三：甲苯（自備） |
80ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
10ml |
4℃ |
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標(biāo)準(zhǔn)品：液體 |
10μl |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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試劑二：液體10ml×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體10 μl×1瓶，10 μmol/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 ml甲苯，充分溶解。
自備儀器和用品：
研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80ml、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體: 直接檢測(cè)。
LPS測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min。
3. 在1.5ml EP管中依次加入下列試劑
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試劑名稱（μl） |
空白管 |
測(cè)定管 |
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蒸餾水 |
150 |
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樣本 |
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50 |
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試劑一 |
300 |
300 |
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試劑二 |
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100 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
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試劑三 |
800 |
800 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液
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試劑名稱（μl） |
空白管 |
測(cè)定管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
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上清液 |
400 |
400 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
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400 |
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試劑四 |
100 |
100 |
100 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取200μl上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測(cè)定吸光值。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
LPS活性計(jì)算公式：
1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W
（3）按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/ml) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]
C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/ml；V反總：反應(yīng)總體積，0.8ml；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml，需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。
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