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蔗糖磷酸合成酶（SPS）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0303 | 售價(jià)（元） | 1656 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0303 |
蔗糖磷酸合成酶（SPS）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S） |
100管/48樣 |
測(cè)定意義：
蔗糖不僅是重要的光合產(chǎn)物，也是植物體內(nèi)運(yùn)輸?shù)闹饕镔|(zhì)，還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸為受體，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統(tǒng)看作是蔗糖合成的主要途徑。
測(cè)定原理：
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸與間苯二酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0303-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
2.5ml |
-20℃ |
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試劑二：1000μg/ml蔗糖溶液 |
10ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
2ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
25ml |
4℃ |
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試劑五：液體 |
6ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定，（在EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
空白管 |
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樣本 |
10 |
10 |
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蒸餾水 |
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45 |
45 |
55 |
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試劑二 |
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10 |
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試劑一 |
45 |
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混勻，25℃準(zhǔn)確水浴10min
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試劑三 |
15 |
15 |
15 |
15 |
沸水浴中煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻
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試劑四 |
210 |
210 |
210 |
210 |
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試劑五 |
60 |
60 |
60 |
60 |
混勻，沸水浴30min，冷卻后，取200μl 至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下測(cè)定各管吸光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
SPS活力單位的計(jì)算
1、按照蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SPS活性(μg /min/mg prot)= C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SPS活性(μg /min/g鮮重) = C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1000μg/ml；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01ml； V2：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；T ：反應(yīng)時(shí)間：10min。
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