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蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/24S）
| 貨號(hào) | SH0298 | 售價(jià)（元） | 744 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0298 |
蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/24S） |
50管/24樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫”器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對(duì)于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。
測(cè)定原理：
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖的含量來反映酶活性的高低。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0298-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
2支 |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
6ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入1.2ml試劑二充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用；
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定，（在EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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樣本 |
20 |
20 |
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試劑三 |
80 |
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試劑一 |
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80 |
混勻，30℃準(zhǔn)確水浴30min后，95℃水浴10min，冷卻至室溫
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試劑四 |
100 |
100 |
95℃水浴5min左右，冷卻至室溫
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蒸餾水 |
800 |
800 |
混勻，540nm下測(cè)定各管吸光值。ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需
要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
SS-Ⅰ活性計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0012x - 0.0492；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為ΔA。
2、按照蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =[(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.1ml； V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。