乳酸含量（LA）檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)

貨號	SH0251	售價（元）	816
規(guī)格	50T/24S	CAS號

貨號	名稱	規(guī)格
SH0251	乳酸含量（LA）檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)	50管/24樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理：

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD⁺還原生成NADH和H⁺，H⁺傳遞給PMS生成的PMSH₂還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。

組成：

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入1.5ml蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加15ml蒸餾水充分溶解。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有5個棕色空瓶）

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

樣本處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。

測定操作：

	樣品對照管	樣品測定管	標準對照管	標準測定管
樣品（μl）	50	50
標準品（μl）			50	50
H₂O（μl）	300	450	300	450
試劑一（μl）	150		150
試劑二（μl）	200	200	200	200
顯色液（μl）	300	300	300	300
充分混勻，于37℃反應30min，于1ml玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定530nm處吸光值，分別記為A1，A2，A3，A4，△A樣=A2-A1；△A標= A4-A3

注意：標準對照管和標準測定管只需測定一次，每個樣品測定管設(shè)一個樣品對照管

計算公式：

1. 按照蛋白含量計算

LA含量（μmol/mg prot）=△A樣÷△A標×C標÷ Cpr

=2×△A樣÷△A標÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

LA含量（μmol/g 鮮重）=△A樣÷△A標×C標÷ W

=2×△A樣÷△A標÷ W

3. 按照細胞數(shù)量計算

LA含量（μmol/10⁴ cell）=△A樣÷△A標×C標÷ 細胞數(shù)量

=2×△A樣÷△A標÷ 細胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

LA含量（μmol/ml）=△A樣÷△A標×C標

=2×△A樣÷△A標

C標：標準品濃度，2mmol/L ；W：樣本質(zhì)量，g/ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml

注意事項：

1. 若吸光值超過2，請進行適當?shù)南♂尯笤龠M行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 最低檢出限為1.8μmol/L。

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