順烏頭酸檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0250 | 售價（元） | 1260 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0250 |
順烏頭酸酶（ACO）活性檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
順烏頭酸酶（aconitase），三羧酸循環(huán)中的酶，催化檸檬酸轉變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化，在順烏頭酸酶作用下，通過脫水與加水反應，使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上，生成易于脫氫氧化的異檸檬酸，為進一步的氧化脫羧反應作準備。
測定原理：
ACO催化檸檬酸轉化成異檸檬酸，異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH，導致340nm處光吸收上升。
組成：
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產品名稱 |
SH0250-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
1.5ml |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑五：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑七：粉劑 |
1支 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加1.5ml蒸餾水充分溶解；現(xiàn)配現(xiàn)用
試劑七：粉劑×1支，4°保存；臨用前加12ml試劑四充分溶解；
工作液：臨用前在12ml試劑七中加入1ml蒸餾水、1ml試劑四、1ml試劑五、1ml試劑六充分混勻
自備儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿轉入離心管內600g，4℃離心5min。
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定胞質順烏頭酸酶活性。
5、 在步驟④的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體順烏頭酸酶活性測定。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定
（1）將工作液，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min；現(xiàn)配現(xiàn)用；若分次用將工作液分裝后于-20°保存，一星期內可用。
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入40μl樣本160μl工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
ACO活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=268×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ACO（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=54×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.108×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間，3min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ACO（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=108×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.216×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.04 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間，3min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。