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幾丁質(zhì)酶（Chitinase）檢測試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號 | SH0207 | 售價（元） | 1500 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0207 |
幾丁質(zhì)酶（Chitinase）檢測試劑盒(微量法100T/48S) |
100管/48樣 |
測定意義：
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。
測定原理：
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物，在585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0207-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
105ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：液體5ml×1瓶，4℃保存。（若出現(xiàn)結(jié)晶，可80℃左右加熱溶解后使用）
自備儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（土壤樣品專用）和蒸餾水。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2. 真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。
3. 培養(yǎng)液：直接測定。
測定操作表：
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對照管 |
測定管 |
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粗酶液（μl） |
80 |
80 |
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提取液（μl） |
120 |
40 |
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試劑一（μl） |
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80 |
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混勻，37℃水浴1h |
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試劑二（μl） |
40 |
40 |
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混勻，沸水浴7min，5000rpm，4℃，離心10min，取上清200μl。 |
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試劑三（μl） |
40 |
40 |
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試劑四（μl） |
80 |
80 |
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混勻，37℃，15min，于微量石英比色皿/96孔板，測定A585，ΔA=A測定-A對照。 |
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計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995
計算公式：
按照樣本重量計算
酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=8.096×（ΔA +0.003）÷W
按照蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr
按細(xì)胞數(shù)量計算
酶活定義：37℃條件下，每104個細(xì)胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=8.096×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計算
酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷V樣=8.096×（ΔA +0.003）
V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1544x-0.003，R2=0.9995
計算公式：
按照樣本重量計算
酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.1544×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=16.192×（ΔA +0.003）÷W
按照蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 16.192×（ΔA +0.003）÷Cpr
按細(xì)胞數(shù)量計算
酶活定義：37℃條件下，每104個細(xì)胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=16.192×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計算
酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷V樣=16.192×（ΔA +0.003）
V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml
注意事項：
1、 反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。
2、 試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施。