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乙醛脫氫酶（ALDH）檢測試劑盒(微量法100T/96S)
| 貨號(hào) | SH0098 | 售價(jià)（元） | 1020 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0098 |
乙醛脫氫酶（ALDH）檢測試劑盒(微量法100T/96S) |
100T/96S |
測定意義：
乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動(dòng)物體內(nèi)，線粒體乙醛脫氫酶能把對(duì)生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化，所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注；同時(shí)，乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應(yīng)用。
測定原理：
在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH，在340nm處的吸光值會(huì)增加，測定340nm處的吸光值變化，可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0098-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
6ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
2ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
1ml |
4℃避光 |
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試劑四：液體 |
1ml |
4℃ |
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試劑五：液體 |
1ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
ALDH提取:
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
測定操作表:
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm。
2、 操作表
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對(duì)照管 |
測定管 |
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樣本（μl） |
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40 |
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試劑一（μl） |
60 |
60 |
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試劑二（μl） |
20 |
20 |
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試劑三（μl） |
10 |
10 |
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試劑四（μl） |
10 |
10 |
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試劑五（μl） |
10 |
10 |
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H2O（μl） |
90 |
50 |
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充分混勻，37℃，微量石英比色皿/96孔板，對(duì)照管調(diào)零，于340nm處測定0s與60s的吸光值A1和A2，△A= A2-A1。 |
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ALDH酶活計(jì)算:
a． 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 804×△A÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 804×△A÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/104cell）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)））÷T= 804×△A÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
（4）按液體體積計(jì)算
酶活定義：每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/ml）= 
×V反總÷V樣÷T= 804×△A
：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b．用96孔板測定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Crp）÷T = 1608×△A÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T = 1608×△A÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/104cell）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)））÷T= 1608×△A÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
酶活定義：每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。
ALDH酶活（nmol/min/ml）= 
×V反總÷V樣÷T= 1608×△A
：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/μmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g