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乙醛脫氫酶(ALDH)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

貨號 SH0097 售價(元) 540
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0097

乙醛脫氫酶(ALDH)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化,所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注;同時,乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應(yīng)用。

測定原理:

在輔酶存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到乙醛脫氫酶的活性。  

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0097-50T/48S

Storage

提取液:液體

50ml

4℃

試劑一:液體

15ml

4℃

試劑二:液體

5ml

4℃避光

試劑三:液體

3ml

4℃避光

試劑液體

2ml

4℃

試劑五:液體

2ml

4℃

說明書

一份

 

自備儀器和用品:

天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、蒸餾水。

ALDH提取

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后,10000g,4℃,離心20min。

2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3. 液體:直接檢測。

測定操作表

 

對照管

測定管

樣本(μl

 

200

試劑一(μl

300

300

試劑二μl

100

100

試劑三μl

50

50

試劑四μl

30

30

試劑五μl

20

20

H2Oμl

500

300

充分混勻,1ml石英比色皿,對照管調(diào)零, 340nm處測定吸光值A1,迅速置于37℃水浴1min,于340nm處測定吸光值A2△A= A2-A1。

ALDH酶活計算

1)按蛋白濃度計算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

ALDH酶活(nmol/min/mg prot= ×V反總÷V×Crp÷T= 804×△A÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計算

酶活定義:每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

ALDH酶活(nmol/min/g鮮重)= ×V反總÷V×W÷V樣總)÷T = 804×△A÷W

3)按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義104個細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol  NAD+的酶量為1個酶活單位。

ALDH酶活(nmol/min/104cell= ×V反總÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個))÷T= 804×△A÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)

4)按液體體積計算

酶活定義:每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

ALDH酶活(nmol/min/ml= ×V反總÷V÷T= 804×△A

NADH微摩爾消光系數(shù),6.22×10-3 L/μmol /cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)體系總體積,1ml;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mlCpr:樣本蛋白濃度,mg/mlW:樣本質(zhì)量,g,T:反應(yīng)時間:1min