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乙醛脫氫酶(ALDH)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)
貨號 | SH0097 | 售價(元) | 540 |
規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
SH0097 |
乙醛脫氫酶(ALDH)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S) |
50管/48樣 |
測定意義:
乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化,所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注;同時,乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應(yīng)用。
測定原理:
在輔酶Ⅰ存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到乙醛脫氫酶的活性。
組成:
產(chǎn)品名稱 |
SH0097-50T/48S |
Storage |
提取液:液體 |
50ml |
4℃ |
試劑一:液體 |
15ml |
4℃ |
試劑二:液體 |
5ml |
4℃避光 |
試劑三:液體 |
3ml |
4℃避光 |
試劑四:液體 |
2ml |
4℃ |
試劑五:液體 |
2ml |
4℃ |
說明書 |
一份 |
自備儀器和用品:
天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、蒸餾水。
ALDH提取:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后,10000g,4℃,離心20min。
2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 液體:直接檢測。
測定操作表:
|
對照管 |
測定管 |
樣本(μl) |
|
200 |
試劑一(μl) |
300 |
300 |
試劑二(μl) |
100 |
100 |
試劑三(μl) |
50 |
50 |
試劑四(μl) |
30 |
30 |
試劑五(μl) |
20 |
20 |
H2O(μl) |
500 |
300 |
充分混勻,1ml石英比色皿,對照管調(diào)零, 于340nm處測定吸光值A1,迅速置于37℃水浴1min,于340nm處測定吸光值A2,△A= A2-A1。 |
ALDH酶活計算:
(1)按蛋白濃度計算
酶活定義:每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Crp)÷T= 804×△A÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活(nmol/min/g鮮重)= ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T = 804×△A÷W
(3)按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活定義:每104個細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個))÷T= 804×△A÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)
(4)按液體體積計算
酶活定義:每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
ALDH酶活(nmol/min/ml)= ×V反總÷V樣÷T= 804×△A
:NADH微摩爾消光系數(shù),6.22×10-3 L/μmol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1ml;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.2ml;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g,T:反應(yīng)時間:1min