總巰基測定試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號 | SH0058 | 售價（元） | 264 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0058 |
總巰基測定試劑盒(微量法100T/48S) |
100T/48S |
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
生物體內巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質，而且參與活性氧清除，后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和GSH含量，能夠間接測定蛋白質巰基含量。
測定原理：
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
組成：
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產品名稱 |
SH0058-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
18ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板、乙醇和蒸餾水。
樣品的制備：
1. 按照組織質量（g）：水體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2. 血清，培養(yǎng)液：稀釋5倍后測定，可取0.1ml樣本，加入0.4ml蒸餾水，混勻，置冰上待測。
測定操作表：
1、 酶標儀預熱30min，調節(jié)波長至412nm。
2、 操作表
在96孔板中加入如下試劑
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對照管 |
測定管 |
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樣品（μl） |
40 |
40 |
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試劑一（μl） |
150 |
150 |
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試劑二（μl） |
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10 |
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乙醇（μl） |
10 |
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混勻，25℃靜置10min，測定412nm吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管。 |
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計算公式：
總巰基標準曲線：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x為標品濃度，單位μmol/ml，y為吸光度ΔA。
1. 組織：
（1）按樣本重量計算
總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V樣總÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培養(yǎng)液：
總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；5：血清，培養(yǎng)液等液體樣本稀釋倍數(shù)；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事項：
最低檢出限為10μmol/L。