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二胺氧化酶（DAO）檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)
| 貨號 | SH0045 | 售價（元） | 1176 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0045 |
二胺氧化酶（DAO）檢測試劑盒(分光光度法50T/24S) |
50管/24樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。
測定原理：
DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺，在460nm處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算DAO活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0045-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
80ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
0.6ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
6ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
3ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿、蒸餾水。
粗酶液提取：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
測定步驟：
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對照管 |
測定管 |
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粗酶液（μl） |
250 |
250 |
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提取液（μl） |
640 |
540 |
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試劑一（μl） |
10 |
10 |
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試劑二（μl） |
100 |
100 |
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試劑三（μl） |
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100 |
混勻，37℃水浴30min，1ml玻璃比色皿，對照管調(diào)零，測定A460
酶活性計算公式：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/g）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 18×A460÷W
（3）按細胞數(shù)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/104cell）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）÷T= 18×A460÷細胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/ml）= 
×V反總÷V樣÷T= 18×A460
ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.25ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；T：反應(yīng)時間，30min
注意事項：
1、如果OD值小于0.01，適當(dāng)加大提取用的樣本質(zhì)量； OD值大于0.8，粗酶液可適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本量。
2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。