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超氧陰離子(OFR)檢測試劑盒(微量法100T/96S)
| 貨號 | SH0044 | 售價（元） | 1176 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0044 |
超氧陰離子(OFR)檢測試劑盒(微量法100T/96S) |
100T/96S |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導(dǎo)的作用，但積累過多時會對細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
測定原理：
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA值可以計算樣品中O2－含量，反應(yīng)式為NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0044-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
110ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
15ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
15ml |
4℃避光 |
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試劑四：氯仿 |
自備 |
-- |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。
超氧陰離子提取：
1、植物、動物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。
3、血清或培養(yǎng)液：直接測定。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至530nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
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空白管 |
測定管 |
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樣本（μl） |
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200 |
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提取液（μl） |
200 |
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試劑一(μl) |
160 |
160 |
混勻，37℃水浴20min
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試劑二（μl） |
120 |
120 |
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試劑三（μl） |
120 |
120 |
混勻，37℃水浴20min
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試劑四（μl） |
200 |
200 |
混勻，8000g，25℃，離心5min，小心吸取上層水相200μl于微量石英比色皿/96孔板中，測定A530。ΔA=A測定-A空白，空白管只要做一管。
超氧陰離子含量計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980
1. 組織：
（1）按照樣本質(zhì)量計算
超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷W
（2）按照蛋白質(zhì)濃度計算
超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細(xì)菌，真菌：
超氧陰離子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量（nmol/ml）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ml·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V樣總：加入提取液體積，1 ml； V反總：反應(yīng)總體積，0.36ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min；2: 2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0121x - 0.0027，R2 = 0.9980
1. 組織：
（1）按照樣本質(zhì)量計算
超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷W
（2）按照蛋白質(zhì)濃度計算
超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot·min）= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細(xì)菌，真菌：
超氧陰離子含量（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量（nmol/ml）=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反總÷V樣×2
=297.52×(ΔA+0.0027)
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ml·min）= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T
=14.88×(ΔA+0.0027)
V樣總：加入提取液體積，1 ml； V反總：反應(yīng)總體積，0.36ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min；2：2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。
注意事項(xiàng)：
1、OD值大于1，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2、樣品制備好后，立刻進(jìn)行測定，請勿將樣品進(jìn)行長時間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。
3、試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施。