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產品信息

產品簡介

LysoTracker?系列探針是對活細胞中的酸性區(qū)室進行選擇性染色的一類熒光染料， LysoTracker探針由一種連接一個弱堿基的熒光基團組成，其中僅弱堿可部分提供質子，以維持PH在中性值。這使LysoTracker?探針能自由無阻地滲透細胞膜，使其能夠標記活細胞。一般聚集在球形細胞器上，適用于觀察溶酶體內部生物合成及相關發(fā)病機理。該類探針具有幾大重要的特點，1）選擇性標記酸性細胞器；2）納摩爾級（nM）濃度即可有效標記活細胞；3）具有多色探針提供，可根據(jù)情況對樣品進行多標實驗。Lysotracker中性pH下僅僅發(fā)生部分質子化，因此該探針標記細胞器的原理可能與其完全質子化并滯留在細胞器膜上有關。探針對酸性細胞器有高選擇性，與二硝基苯 (DNP)不同， 溶酶體紅色熒光探針DND-99探針不需二抗來檢測。

warbio公司提供LysoTracker? Red DND-99為紅色熒光標記的溶酶體探針，具有577/590 nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。本品以溶于無水DMSO的1 mM儲存液形式提供。

溶酶體紅色熒光探針DND-99可用于多種顏色熒光檢測。

步驟說明

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使 DMSO 溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM   儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為 50-75nM ；

【注意】： 1 ）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。 2 ）若細胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現(xiàn)象。

2. 染色

2.1 對于貼壁細胞

1 ）將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。

2 ）待細胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量 37 ℃預熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定）。

3 ）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

2.2   對于懸浮細胞

1 ）離心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃預熱的探針工作液重懸細胞，于生長狀態(tài)下孵育 30min ～ 2h （具體時間需根據(jù)細胞類型而定）。

3 ）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞。

4 ）置于熒光鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長染色時間。

【注意】：對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經 BD Cell-Tak 處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細胞的方法進行染色。注意事項

1）DMSO有毒，使用時請小心操作。

2）了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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