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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

MTT 比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。MTT 檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan 并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定 570nm 波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

warbio MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒采用了特有的 Formazan solvent，使檢測(cè)本底低，靈敏度高，線性范圍寬.。

試劑盒組分 

組分 A: MTT Solution(5mg/ml)  5 mL      -20℃，避光

組分 B: Formazan Solvent       60 mL     RT

保存條件：

    -20℃，避光 條件下保存，保質(zhì)期 12 個(gè)月。

操作步驟(僅供參考)：

1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無(wú)需消化)。

2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。

3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。

4、 細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 個(gè)細(xì)胞/孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。

5、 37℃ 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。

6、 按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予 0～20μl 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育 4h。

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。

9、 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 570nm 測(cè)定各孔吸光度。

      注意事項(xiàng)

MTT solution 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。

由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)注意蒸發(fā)問(wèn)題。

 MTT solution 在低溫情況下會(huì)凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

Formazan solvent 可以-20℃儲(chǔ)存，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

觀察 formazan 是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。

應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對(duì)照。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。。

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