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潮霉素B（50 mg/ml）Hygromycin B (50 mg/ml)
| 貨號 | M0942 | 售價（元） | 780 |
| 規(guī)格 | 20ml | CAS號 | 31282-04-9 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
貨號
名稱
規(guī)格
價格
M0942
潮霉素B（50
mg/ml）Hygromycin B (50 mg/ml)
20ml
M0943
潮霉素B Hyaromycin B
1g
680
M0943-50g
Hygromycin
B 潮霉素B
50g
詢價
780
產(chǎn)品簡介
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細(xì)胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin? 和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
本品是無菌的潮霉素B溶液（50mg/ml in PBS buffer），可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。
產(chǎn)品性質(zhì)
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CAS號（CAS NO.） |
31282-04-9 |
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分子式（Formula） |
C20H37N3O13 |
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分子量（Molecular Weight） |
527.52 |
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外觀（Appearance） |
白色至淡黃色至褐色粉末 |
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純度（Purity） |
＞90% by HPLC |
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溶解性（Solubility） |
易溶于水 |
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活力（Potency） |
≥1050 U/mg |
使用方法
1.常用篩選濃度
注意：潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個濃度。
1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2）根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
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終濃度（μg/mL） |
培養(yǎng)基體積（ml） |
5mg/ml潮霉素B加入體積（ml） |
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50 |
9.9 |
0.1 |
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100 |
9.8 |
0.2 |
|
250 |
9.5 |
0.5 |
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500 |
9.0 |
1.0 |
|
750 |
8.5 |
1.5 |
|
1000 |
8.0 |
2.0 |
3）第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4）接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5）按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1）轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果最好。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3）篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4）挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5）之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項(xiàng)
1）潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2） 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。
3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存，2年有效。也可以放在-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
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規(guī)格 |
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Blasticidin S (10 mg/ml) 殺稻瘟菌素S （滅瘟素）（10 mg/ml） |
5×10mg |
2450 |
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M0336 |
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20mg |
921 |
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M1113 |
Zeocin博萊霉素（100 mg/ml） |
8×125mg |
2200 |
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M2150 |
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽 |
25mg |
678 |