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潮霉素B(50 mg/ml)Hygromycin B (50 mg/ml)

貨號(hào) M0942 售價(jià)(元) 780
規(guī)格 20ml CAS號(hào) 31282-04-9
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品信息

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格

M0942

潮霉素B50 mg/mlHygromycin B (50 mg/ml)

20ml

780

M0943

潮霉素B Hyaromycin B 

1g

680

M0943-50g

Hygromycin B 潮霉素B 

50g

詢價(jià)

產(chǎn)品簡介

潮霉素BHygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細(xì)菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。

大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyghph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記,用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),ZeocinBlasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。

本品是無菌的潮霉素B溶液(50mg/ml in PBS buffer),可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。

產(chǎn)品性質(zhì)

CAS號(hào)(CAS NO.

31282-04-9

分子式(Formula

C20H37N3O13

分子量(Molecular Weight

527.52

外觀(Appearance

白色至淡黃色至褐色粉末

純度(Purity

90% by HPLC

溶解性(Solubility

易溶于水

活力(Potency

1050 U/mg



使用方法

1.常用篩選濃度

注意:潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。

一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。

1)第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。

2)根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

終濃度(μg/mL

培養(yǎng)基體積(ml

5mg/ml潮霉素B加入體積(ml

50

9.9

0.1

100

9.8

0.2

250

9.5

0.5

500

9.0

1.0

750

8.5

1.5

1000

8.0

2.0

3)第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4)接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5)按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1)轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果最好。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。

2)每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3)篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

4)挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5)之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

注意事項(xiàng)

1)潮霉素B的抗性基因(hyghph)除了來自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicusKlebsiella pneumoniae

2) 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請(qǐng)小心操作。

3) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存,2年有效。也可以放在-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

產(chǎn)品

規(guī)格

單價(jià)/

M9337

Blasticidin S (10 mg/ml) 殺稻瘟菌素S (滅瘟素)(10 mg/ml

5×10mg

2450

M0336

Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素(20 mg/ml

20mg

921

M1113

Zeocin博萊霉素(100 mg/ml

8×125mg

2200

M2150

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽

25mg

678



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