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一種RPA與CRISPR相結(jié)合的多靶標(biāo)核酸檢測(cè)微流控芯片

    Cas12a CRISPR 核酸檢測(cè)過程中被激活后的非特異性切割特性限制了多靶點(diǎn)的檢測(cè)。因此,作者設(shè)計(jì)了一種壓力輔助的離心驅(qū)動(dòng)的呼吸道病原體檢測(cè)微流控芯片,該芯片可在 30 min 內(nèi)完成 14 重檢測(cè)。

如圖 1,直徑 80 mm 的芯片由 CNC 雕刻而成。該芯片含有 14 個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)單元,一次可完成 14 個(gè)靶標(biāo)檢測(cè)。

 

 

        圖 1

芯片內(nèi)環(huán)上有一個(gè)公用的彎曲流道,連接著 14 個(gè)檢測(cè)單元,每個(gè)檢測(cè)單元包括一個(gè) RPA 擴(kuò)增腔和一個(gè) CRISPR 檢測(cè)腔,用于單個(gè)靶標(biāo)檢測(cè)。

芯片最窄處的流體通道寬 0.2 mm,RPA 和CRISPR 檢測(cè)腔的體積均為10 μL。

 

        圖 2

如圖 3,彎曲流道與 RPA 腔之間的短流道逐漸加寬,以減少前后腔連接流道之間的流動(dòng)阻力。同時(shí),每個(gè) RPA 腔與 CRISPR 檢測(cè)腔之間的流道都是疏水的。

樣本注入末端設(shè)有廢液腔,用于存放進(jìn)樣后殘留的液體。每個(gè)檢測(cè)單元均設(shè)有通氣孔,通氣孔內(nèi)裝有高密度聚乙烯顆粒棉濾,以防氣溶膠污染。

 

        圖 3

將特異性的 RPA 引物 和 CRISPR 檢測(cè)試劑凍干制成微球,預(yù)存于擴(kuò)增腔和檢測(cè)腔內(nèi)。

將純化后的核酸樣品與rpa緩沖液、醋酸鎂和無核酸酶水混合,形成 164 μl 的溶液。制備好加標(biāo)體系后,用移液槍將164 μl 反應(yīng)體系吸出,緩慢均勻地注入芯片中。

 

                                                                圖4

操作時(shí),通過加樣口加入樣品和凍干試劑復(fù)溶液,使其依次進(jìn)入到擴(kuò)增腔內(nèi)。隨后通過加樣口加入石蠟油,將流道內(nèi)殘留的液體推入廢液腔,并隔離擴(kuò)增腔。

                       圖 5

相關(guān)產(chǎn)品:

RPA試劑盒及試紙條系列:

貨號(hào)

產(chǎn)品

規(guī)格

TABAS03KIT

TwistAmp Basic Kit DNA擴(kuò)增試劑盒

96T

TAEXO02KIT

TwistAmp exo 試劑盒

96T

B8201C1

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(DNA基礎(chǔ)型)

48T

B8202C3

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(DNA熒光型)

48T

B8203C5

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(DNA試紙條型)

48T

B8204C7

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(RNA基礎(chǔ)型)

48T

B8205C9

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(RNA熒光型)

48T

B8206C0

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(RNA試紙條型)

48T

JY0209

雙靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l(彩虹型)

50T

JY0201

單靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l(彩虹型)

50T

JY0307

CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)試紙條

50T

JY0301

CRISPR Cas12/13 HybriDetect試紙條

50T

JY0308

CRISPR雙酶切檢測(cè)試紙條(變色龍)

50T

 

  Cas酶系列

貨號(hào)

包裝規(guī)格

中文名稱

32108-01

100 pmoL

LbCas12a (Cpf1)

32108-03

1,000 pmoL

LbCas12a (Cpf1)

32117-01

100 pmoL

LwaCas13a (C2c2)

32117-03

1,000 pmoL

LwaCas13a (C2c2)

32118-01

100 pmoL

AapCas12b (C2c1)

32118-03

1,000 pmoL

AapCas12b (C2c1)

32119-01

100 pmoL

Un1Cas12f1 (Cas14a1)

32119-03

1,000 pmoL

Un1Cas12f1 (Cas14a1)

32104-01

100 pmoL

AsCas12a (Cpf1)

32104-03

1,000 pmoL

AsCas12a (Cpf1)

32116-01

100 pmoL

AacCas12b (C2c1)

32116-03

1,000 pmoL

AacCas12b (C2c1)

32106-01

100 pmoL

FnCas12a (Cpf1)

32106-03

1,000 pmoL

FnCas12a (Cpf1)

32110-01

100 pmoL

Lb5Cas12a (Cpf1)

32110-03

1,000 pmoL

Lb5Cas12a (Cpf1)

32101-01

100 pmoL

SpCas9

32101-03

1,000 pmoL

SpCas9

32102-01

100 pmoL

Sp-dCas9

32102-03

1,000 pmoL

Sp-dCas9

32120-01

100 pmoL

Sp-nCas9(H840A)

32120-03

1,000 pmoL

Sp-nCas9(H840A)

 

 

 

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