當(dāng)前位置： 首頁(yè) - 新聞中心 - 專(zhuān)業(yè)知識(shí)
PE(藻紅蛋白，Phycoerythrin)是從紅藻中分離出來(lái)的240 kDa 藻膽蛋白。它發(fā)出強(qiáng)烈的黃橙色熒光（比熒光素亮約 25 倍），摩爾消光系數(shù)為 1,960,000 cm -1 M -1，熒光量子產(chǎn)率為 0.84。天然狀態(tài)下的 PE 熒光光譜具有三個(gè)吸光度峰，一個(gè)主吸光度峰位于 565 nm，兩個(gè)次級(jí)吸光度峰位于 496 nm 和 545 nm，一個(gè)發(fā)射峰位于 574 nm。這三個(gè)吸光度峰提高了與配備藍(lán)色 (488 nm)、綠色 (532 nm) 和黃色激光 (561-568 nm) 的成像儀器的兼容性。
在使用PE之前，必須先將其與具有生物特異性的分子（例如抗體、鏈霉親和素或膜聯(lián)蛋白V）結(jié)合。PE和PE串聯(lián)結(jié)合物通常用于流式細(xì)胞術(shù)、微陣列和 ELISA，由于其快速光漂白特性，在免疫熒光顯微鏡中的用途有限。
圖1.PE的熒光光譜
R-PE（R-藻紅蛋白，R-Phycoerythrin）是一種特殊類(lèi)型的藻紅蛋白，其主要吸收峰在 565 nm，次要吸收峰在496和545 nm。不同物種的 R-PE 中次要吸收峰的相對(duì)突出程度存在很大差異。PE 有三種亞基：α（20KDa）、β（20KDa）和γ（30KDa）。R-PE的α亞基僅包含藻紅蛋白 (PEB) 發(fā)色團(tuán)，而β和γ亞基則同時(shí)包含PEB和藻尿蛋白 (PUB)。不同物種的 PE 吸收光譜的變化反映了亞基的 PEB/PUB 比率的差異。R-PE和密切相關(guān)的B-PE 是熒光最強(qiáng)烈的藻膽蛋白，量子效率可能超過(guò)90%，并且其橙色熒光在任何中等濃度的溶液中都可以用肉眼輕易看到。
圖2.RPE的熒光光譜
#AAT PE&R-PE的優(yōu)點(diǎn)
長(zhǎng)波長(zhǎng)發(fā)射曲線最大程度地減少了生物材料的自發(fā)熒光
藻膽素與蛋白質(zhì)骨架共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致熒光猝滅最小
水溶性極高，有利于結(jié)合反應(yīng)的化學(xué)操作
顯著的Stokes位移和可解析的發(fā)射光譜，適用于流式多色分析
多個(gè)位點(diǎn)可與抗體、花青染料或iFluor ?染料等有機(jī)和合成化合物穩(wěn)定結(jié)合
用于多色流式細(xì)胞術(shù)的串聯(lián)染料——使用單一激發(fā)光產(chǎn)生一系列發(fā)射信號(hào)。
圖3.頂部）使用4激光光譜流式細(xì)胞儀生成光譜圖。使用空間偏移激光器（355 nm、405 nm、488 nm 和 640 nm）創(chuàng)建四個(gè)不同的發(fā)射曲線，然后組合起來(lái)產(chǎn)生整體光譜特征。
底部）用 PE 抗人 CD4 *SK3* 偶聯(lián)物染色的 PBMC 的流式細(xì)胞術(shù)分析。使用 Aurora 光譜流式細(xì)胞儀在PE特異性 B6-A 通道中監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)。
PE串聯(lián)染料是由兩種不同的共價(jià)連接的熒光團(tuán)組成，一個(gè)供體（例如R-PE）和一個(gè)發(fā)射較長(zhǎng)波長(zhǎng)熒光的受體（例如 Cy5 ?、Cy7 ?或 iFluor ? 647）。在流式細(xì)胞術(shù)中，串聯(lián)染料非常適合細(xì)胞的多色參數(shù)分析。圖4說(shuō)明了FITC、PE、PE-Cy5 ?和PE-Cy7 ? 的出色光譜分離，無(wú)需大量補(bǔ)償即可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的四色分析。此外，所有四種熒光團(tuán)都能被 488 nm 氬離子激光同時(shí)有效激發(fā)。
圖4.FITC（綠色）、PE（黃色）、PE-Cy5 ?（橙色）和 PE-Cy7 ?（紅色）的吸收和發(fā)射光譜表明，它們具有清晰的光譜分離，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行四色分析。所有四種熒光團(tuán)均被 488 nm 氬激光線（藍(lán)色）有效激發(fā)。FITC 可使用 FITC 濾光片組進(jìn)行可視化。PE 可使用 Cy3 濾光片組進(jìn)行可視化。PE-Cy5 ?和 PE-Cy7 ?可分別使用 Cy5 和 Cy7 濾光片組進(jìn)行可視化。
#串聯(lián)染料使用建議
避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在光線下，串聯(lián)染料極易受到光漂白的影響，應(yīng)始終避免光照
不要冷凍（-20℃）串聯(lián)結(jié)合物，這可能會(huì)導(dǎo)致供體變性
固定和通透步驟可能會(huì)降低串聯(lián)染料的亮度
在進(jìn)行多色流式細(xì)胞術(shù)時(shí)，使用適當(dāng)?shù)膶?duì)照，如用于背景的同型對(duì)照、未染色的細(xì)胞和用于補(bǔ)償?shù)膯紊珜?duì)照
在分析數(shù)據(jù)之前確定是否需要補(bǔ)償，這是由于兩個(gè)或多個(gè)串聯(lián)體的發(fā)射光譜重疊。
AAT提供多種PE和PE串聯(lián)染料：
?
表1.適合多色流式分析使用的PE串聯(lián)染料
?
表2.適合標(biāo)記CD抗體的PE和PE串聯(lián)染料可用于流式細(xì)胞術(shù) (FACS)
ε = molar extinction coefficient at their maximum absorption wavelength最大吸收波長(zhǎng)處的摩爾消光系數(shù)(Units = cm-1M-1).
?
表3.AAT獨(dú)有的PE-iFluor系列串聯(lián)染料可以完美替代PE-Cy5，PE-Cy7，PE-AF 700，PE-Texas Red
圖5.抗人CD4抗體全血細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析(克隆:SK3)
偶聯(lián)物：CD4-XX780(流式抗體供應(yīng)商A)，CD4-PE-Cy7(流式抗體供應(yīng)商B)，CD4-PE-iFluor750(AAT)
AAT Bioquest 的高性能產(chǎn)品使科研人員能夠更好地了解生物化學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)。產(chǎn)品主要分為五類(lèi)：
①反應(yīng)性熒光和發(fā)光探針、生物素和標(biāo)記酶，用于標(biāo)記小藥物分子和生物聚合物，例如蛋白質(zhì)、核酸和碳水化合物
②用于檢測(cè)蛋白質(zhì)、核酸和活細(xì)胞的熒光和發(fā)光探針
③用于檢測(cè)各種酶（特別是水解酶和氧化還原酶）的熒光和發(fā)光探針
④為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究而開(kāi)發(fā)和改進(jìn)的試劑
⑤生理和神經(jīng)探針，如鈣指示劑和膜電位探針
- 上一頁(yè)： 福利 | mRNA產(chǎn)品 訂購(gòu)送好禮
- 下一頁(yè)： Adipogen: 疾病標(biāo)志物 金標(biāo)ELISA試劑盒