微管是由蛋白質(zhì)組成的管狀結(jié)構(gòu)，是維持細(xì)胞形態(tài)的骨架。但是，微管蛋白不僅僅如此簡單。如今對Tubulin蛋白以及微管的聚合與解聚的研究已經(jīng)成為當(dāng)今癌癥研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。
Cytoskeleton Inc.是第一家為科學(xué)界提供生物活性微管蛋白、試劑盒和試劑的公司。我們持續(xù)提供微管蛋白試劑盒，可以幫助科研工作者高效地研究微管蛋白動力學(xué)；從而提高科學(xué)生產(chǎn)力，同時(shí)節(jié)省研究人員寶貴的時(shí)間。
微管蛋白聚合檢測試劑盒
兩種常見的微管蛋白聚合檢測試劑盒類型：
（1）基于熒光分析（DAPI熒光基團(tuán)）的新型聚合分析方法（Fluorescence-based）
（2）基于吸光度（光散射）的經(jīng)典型分析方法（OD-based）
在大多數(shù)情況下，建議使用基于熒光分析的新型聚合分析方法，因?yàn)樵摲N檢測方法具有高靈敏度、高效、高通量且性價(jià)比高等優(yōu)點(diǎn)。該方法是基于光散射原理，激發(fā)光透過微管會發(fā)生散射，其散射程度與微管聚合物的濃度在一定范圍內(nèi)成正比。根據(jù)這一原理我們便能通過檢測樣品吸光度從而監(jiān)測微管的聚合。
與微管蛋白相互作用的化合物或蛋白質(zhì)通常會改變聚合的一個(gè)或多個(gè)特征階段。如圖1所示，在標(biāo)準(zhǔn)聚合反應(yīng)中加入抗有絲分裂聚合增強(qiáng)劑紫杉醇（Paclitaxel）后，可以觀察到濃度為3μM的紫杉醇可消除成核階段，提高生長階段的Vmax值。因此，該分析方法的一個(gè)應(yīng)用是鑒定新型抗有絲分裂劑。圖1還顯示了添加微管穩(wěn)定藥物長春堿（Nocodazole）的效果。在3μM的最終濃度下，長春堿引起V-max的急劇下降和最終聚合物質(zhì)量的降低。
圖1. 使用基于熒光分析法的微管蛋白聚合檢測試劑盒（BK011P）進(jìn)行。Tubulin分別與Paclitaxel和Vinblastine反應(yīng)，且設(shè)置另一個(gè)單獨(dú)孵育Tubulin作為對照組。每個(gè)條件都進(jìn)行了重復(fù)的測試。聚合反應(yīng)在360 nm下激發(fā)，420 nm發(fā)射。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)為聚合曲線，該曲線將聚合過程分為3個(gè)階段：成核期，生長期，和穩(wěn)態(tài)期。
部分相關(guān)熱門試劑盒：
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Tubulin生化試劑盒名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Tubulin Polymerization Assay Biochem Kit?>97% Pure Porcine Brain Tubulin, OD Based |
24-30 Assays |
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Tubulin Polymerization Assay Biochem Kit?>99% Pure Porcine Brain Tubulin, OD Based |
24-30 Assays |
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Tubulin Polymerization Assay Biochem Kit?>99% Pure Porcine Brain Tubulin, Fluorescence based |
96 Assays |
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Microtubule Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit? |
30-100 Assays |
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Microtubule / Tubulin In Vivo Assay Biochem Kit?Quantitates in vivo ratio of tubulin polymers & monomers |
30-100 Assays |
純化的微管結(jié)合蛋白(MAPs)和馬達(dá)蛋白（Motors）
微管結(jié)合蛋白 ( Microtubule Associated Proteins，MAP) 是與微管或微管蛋白可以相互作用的蛋白質(zhì)。通過與微管的相互作用，MAP 蛋白執(zhí)行一系列功能，包括微管的動態(tài)控制、沿微管運(yùn)輸、協(xié)助細(xì)胞運(yùn)動和塑性，以及一系列其他的功能。
如常見的MAP1、MAP2和Tau蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織中表達(dá)，且有助于穩(wěn)定微管的結(jié)構(gòu)。馬達(dá)蛋白（Motor）也可以被分類為MAP蛋白，但通常被稱為驅(qū)動蛋白（Kinesin）或動力蛋白（Dynein）。細(xì)胞骨架專家Cytoskeleton公司提供的MAP相關(guān)蛋白是從富含MAP的tubulin蛋白中分離出來的，這種tubulin蛋白主要含有MAP2，但也含有少量的MAP1、MAP4和Tau蛋白。Cyto還提供來自腦組織的Tau蛋白，Tau蛋白有四種常見的亞型。
部分相關(guān)熱門MAPs蛋白及Motors蛋白：
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產(chǎn)品 |
來源 |
純度 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Eg5 Homolog BimC Motor Domain Protein |
A. nidu- lans |
>85% |
2 x 25 μg |
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Chromokinesin Motor Domain Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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Eg5 Motor Domain Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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10 x 25 μg |
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1 x 1 mg |
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Eg5 Homolog BimC Motor Domain Protein |
A. fumiga- tus |
>85% |
2 x 15 μg |
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KIFC3 Motor Domain Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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KIF3C Motor Domain Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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Kinesin Heavy Chain Motor Do- main Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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1 x 1 mg |
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MCAK Motor Domain Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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MKLP1 Motor Domain Protein |
H. sapiens |
>85% |
2 x 25 μg |
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1 x 1 mg |
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Tau ProteinBovine brain |
Bovine Brain |
>90% |
1 x 50 μg |
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3 x 50 μg |
圖2. Pre-Formed Microtubules (Cat.# MT002) 微管是馬達(dá)驅(qū)動蛋白的底物，馬達(dá)驅(qū)動蛋白在細(xì)胞內(nèi)參與很多的驅(qū)動活動。馬達(dá)驅(qū)動蛋白被證明可以承載著如染色體和囊泡的載體沿著微管軌道移動。下圖所示的Pre-Formed Microtubules（Cat.#MT002）是馬達(dá)驅(qū)動蛋白的底物之一，這個(gè)蛋白與Kinesin Enzyme Linked Inorganic Phosphate ATPase Kit (Cat. #BK060)同時(shí)使用，可以用于檢測MAPs。
Tubulin免疫熒光（IF）呈象工具
Cytoskeleton公司提供亮度高且性質(zhì)穩(wěn)定的微管蛋白活細(xì)胞呈象工具，如熒光標(biāo)記微管蛋白，SiR, SiR700和SPY?探針。
Cyto公司的熒光標(biāo)記微管蛋白具有高純度和高生物活性的特點(diǎn)，用熒光微管蛋白工具來進(jìn)行微管動力學(xué)實(shí)驗(yàn)，使用
我們的熒光小管蛋白和Spirochome的SiR、SiR700和SPY?探針，提供了明亮和穩(wěn)定的微管蛋白活細(xì)胞成像工具。細(xì)胞骨架的熒光管蛋白純度高，高度公開，具有生物活性。利用熒光微管蛋白工具研究微管動力學(xué)，利用Spirochrome探針觀察活細(xì)胞中的微管蛋白。
圖3.
部分相關(guān)熱門熒光標(biāo)記Tubulin蛋白：
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產(chǎn)品 |
Ex / Em wavelength |
來源 |
純度 |
貨號 |
規(guī)格 |
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AMCA Labeled Tubulin |
350 +/-20 nm |
Porcine Brain |
>99% |
5 x 20 μg |
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440 +/-20 nm |
20 x 20 μg |
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HiLyte Fluor? 488 Labeled Tubulin |
460 +/-20 nm |
Porcine Brain |
>99% |
5 x 20 μg |
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520 +/-20 nm |
20 x 20 μg |
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TRITC Rhodamine Labeled Tubulin |
535 +/-20 nm |
Porcine Brain |
>99% |
5 x 20 μg |
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590 +/-20 nm |
20 x 20 μg |
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X-Rhodamine Labeled Tubulin |
560 +/- 20 nm |
Bovine Brain |
>99% |
5 x 20 μg |
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620 +/- 20 nm |
20 x 20 μg |
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HiLyte Fluor? 647 Labeled Tubulin |
620 +/-20 nm |
Porcine Brain |
>99% |
5 x 20 μg |
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670 +/-20 nm |
20 x 20 μg |
Spirochrome的活細(xì)胞染色探針可通過細(xì)胞膜的物質(zhì)，并可以對微管蛋白進(jìn)行染色。與SiR和SiR700染料相比，SPY?具有亮度更高、細(xì)胞毒性更低的特點(diǎn)，無需基因操作或過表達(dá)即可對微管進(jìn)行染色
圖4. 左圖：在Matrigel基質(zhì)膠中，用SIR-Tubulin（紅色）對MCF10A細(xì)胞中表達(dá)的H2B-GFP基因(藍(lán)色)進(jìn)行染色；右圖：用共聚焦顯微鏡與STED顯微鏡成像的SPY?染料標(biāo)記的HeLa細(xì)胞相比較。
部分熱門活細(xì)胞呈象工具：
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產(chǎn)品名 |
Ex/Em |
貨號 |
規(guī)格 |
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SiR-Tubulin? KitIncludes SiR-Tubulin, and Verapamil |
630 / 680 nm |
50 nmol |
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Cytoskeleton KitIncludes SiR-Actin, SiR-tubulin andVerapamil |
630 / 680 nm |
50 nmol each |
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SiR700-Tubulin KitIncludes SiR700-Tubulin and Verapamil |
690 / 720 nm |
35 nmol |
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SPY555-TubulinIncludes SPY555-Tubulin |
555 / 580 nm |
100 stains |
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SPY650-TubulinIncludes SPY650-Tubulin |
652 / 674 nm |
100 stains |
純化的微管蛋白
對于一般的研究目的，推薦適用來自腦組織的微管蛋白（純度大于99%）（# T240）。這是一種用于微管結(jié)合研究和微管聚合分析的高通量底物。其他更專門的微管蛋白包括來自癌癥細(xì)胞的微管蛋白，適用于藥物篩選，以及來自植物或真菌來源的微管蛋白，它們分別適用于不同領(lǐng)域。
部分熱門純化微管蛋白：
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產(chǎn)品名 |
來源 |
純度 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Tubulin Protein Lyophilized (no glycerol) |
Porcine Brain |
>99% |
1 x 1 mg |
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5 x 1 mg |
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20 x 1 mg |
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1 x 10 mg |
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Tubulin Protein, MAP rich |
Porcine Brain |
70% tubulin 30% MAPs |
1 x 1 mg |
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5 x 1 mg |
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1 x 10 mg |
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Tubulin for HTS Applications |
Porcine Brain |
97% |
1 x 4 mg |
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1 x 40 mg |
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Tubulin Protein |
Porcine Brain |
>99% |
1 x 1 mg |
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5 x 1 mg |
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20 x 1 mg |
關(guān)于Cytoskeleton
Cytoskeleton作為專業(yè)的細(xì)胞骨架和小G蛋白相關(guān)產(chǎn)品的生物科技公司，可以提供專業(yè)且高度可靠的Pulldown和GLISA檢測試劑盒，在過去的20年里，無數(shù)各個(gè)領(lǐng)域的研究人員已經(jīng)利用Cytoskeleton的產(chǎn)品產(chǎn)出許多優(yōu)秀的實(shí)驗(yàn)成果。