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beta Actin,肌動(dòng)蛋白,細(xì)胞骨架蛋白。它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定,在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。beta Actin 作為內(nèi)參是得到公認(rèn)的,針對(duì)大多數(shù)組織和細(xì)胞來(lái)說(shuō)的,它廣泛分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),表達(dá)量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細(xì)胞內(nèi),beta Actin 的表達(dá)量就很少。
GAPDH,甘油醛-3-磷酸脫氫酶,該酶是糖酵解反應(yīng)中的一個(gè)酶,幾乎在所有組織細(xì)胞中都高水平表達(dá),在同種細(xì)胞或組織中的表達(dá)量一般是恒定的,且很少受外部誘導(dǎo)物的影響。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下,會(huì)增加 GAPDH 在特定細(xì)胞和組織中的表達(dá)。
beta Tubulin,微管蛋白,細(xì)胞骨架蛋白。作為內(nèi)參抗體,beta Tubulin 表達(dá)通常不會(huì)發(fā)生改變,因此被廣泛用于 Western Blot 內(nèi)參,也常被用于免疫染色觀察細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)。
標(biāo)簽抗體:
Flag抗體-抗Flag標(biāo)簽抗體
融合標(biāo)簽,如Flag、GST等標(biāo)簽的使用可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白。
His抗體-抗His標(biāo)簽抗體
融合標(biāo)簽根據(jù)其相對(duì)分子質(zhì)量大小可以分為兩大類:大的蛋白質(zhì)分子和小的多肽片段。融合標(biāo)簽的使用可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。
GST抗體-抗GST標(biāo)簽抗體
隨著越來(lái)越多的新基因的發(fā)現(xiàn),基因融合蛋白表達(dá)體系以其在新發(fā)現(xiàn)蛋白研究中的顯著優(yōu)勢(shì)已得到廣泛應(yīng)用。其中GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)產(chǎn)率高、表達(dá)產(chǎn)物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細(xì)菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過(guò)親和層析得到。GST融合蛋白可被位點(diǎn)特異性蛋白酶裂解,從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個(gè)非常好的強(qiáng)免疫原,因此,很容易制備抗新蛋白的抗體。正是由于以上的優(yōu)點(diǎn),商品化的GST融合蛋白表達(dá)體系以及GST標(biāo)簽抗體系統(tǒng)至今仍被廣泛應(yīng)用。
GFP抗體-抗GFP標(biāo)簽抗體
常用的標(biāo)簽包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein),簡(jiǎn)稱GFP,這種蛋白質(zhì)zui早是由下村脩等人在1962年在一種學(xué)名Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),在藍(lán)色波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下,會(huì)發(fā)出綠色螢光。
Myc抗體-抗Myc標(biāo)簽抗體
隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的迅猛發(fā)展,重組蛋白質(zhì)的使用在近年來(lái)大大增加。重組雜合體含有一個(gè)親和標(biāo)簽如GST、Myc、His等,可用于輔助目標(biāo)蛋白的純化,這已經(jīng)被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測(cè)的這個(gè)有點(diǎn)被廣泛認(rèn)可。在1985年開發(fā)出鼠抗c-myc標(biāo)簽抗體并被作為免疫化學(xué)試劑用于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域中。Myc標(biāo)簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測(cè)重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。
HA抗體-抗HA標(biāo)簽抗體
融合標(biāo)簽,如HA、His等標(biāo)簽的使用可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標(biāo)蛋白。
相關(guān)產(chǎn)品:
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4.共價(jià)偶聯(lián)Agarose產(chǎn)品
A10003: NHS- ActivatedMagarose Beads
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