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莫能菌素Monensin 細胞內(nèi)蛋白運輸?shù)囊种苿?/div>

        莫能菌素Monensin 細胞內(nèi)蛋白運輸?shù)囊种苿?/strong>

        流式胞內(nèi)染色中最常用的活化細胞方法就是用一定濃度的PMA和Ionomycin刺激細胞4-6小時,同時加入蛋白轉運抑制劑(通常是monensin或brefeldin A)阻止高爾基體將新分泌蛋白運輸?shù)郊毎?,從而達到通過流式來檢測細胞因子的目的。

常見的蛋白轉運抑制劑:
Monensin莫能霉素, CAS NO:22373-78-0
產(chǎn)品簡介:莫能菌素是細胞內(nèi)蛋白運輸?shù)囊种苿?。莫能菌素在培養(yǎng)細胞中進行孵育會導致蛋白質轉運到高爾基體(GC)和內(nèi)質網(wǎng)(ER)中的蛋白質積聚。在細胞體外活化的最后幾個小時內(nèi)添加莫能菌素可增強細胞內(nèi)細胞因子的檢測。莫能菌素可有效增強大多數(shù)小鼠和人類細胞內(nèi)細胞因子的檢測;但是,建議研究人員在其特定的測定系統(tǒng)中評估該試劑以及其他蛋白質轉運抑制劑(例如布雷菲德菌素A)的用途和功效。
Brefeldin A(BFA,布雷非德菌素A), CAS NO:20350-15-6
產(chǎn)品簡介:一種常用的蛋白轉運抑制劑,特異性地可逆地阻斷蛋白質從內(nèi)質網(wǎng)(ER)轉運到高爾基體(Golgi)。經(jīng)BFA處理,高爾基體很快被破壞并融合到內(nèi)質網(wǎng)上,該過程呈現(xiàn)能量、溫度和微管依賴性。BFA是一種真菌代謝物,最初曾用作抗病毒試劑,現(xiàn)主要用于研究蛋白轉運。BFA也常被用于抑制細胞因子等蛋白的分泌,并用于增強分泌蛋白的免疫染色檢測。BFA可激活神經(jīng)鞘磷脂循環(huán)(sphingomyelin cycle),還可誘導一些腫瘤細胞發(fā)生凋亡。
PMA 佛波肉豆蔻醋酸  CAS NO:16561-29-8
Phorbol 12-myristate 13-acetate( 佛波肉豆蔻醋酸) ,簡稱為PMA 也稱為TPA CAS NO 16561-29-8,一種廣泛用于體內(nèi)外實驗的佛波酯(phorbol ester )類PKC激舌劑。PMA可抑制Fas誘導的細胞凋亡,同時又可誘導HL-60細胞的周亡發(fā)生。PMA是一種強效的腫瘤促進劑能夠誘導小鼠皮膚瘤生成。常常與離子霉素Ionomycin 聯(lián)合刺激多種免疫細胞,以產(chǎn)生細胞因子。同時也與蛋白轉運抑制劑如布雷非德菌素A( Brefeldin A ,) ,莫能霉素( Monensin ) 聯(lián)合使用抑制細胞因子外分泌,保留在細胞內(nèi)以準確分析細胞因子表達水平。

實驗參考:


細胞因子

克隆號

靶向細胞

刺激物

刺激時間

蛋白轉運抑制劑

表面標志蛋白

IL-2

JES6-5H4

Splenocytes

PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1μg/ml)

4-6 h

monensin or brefeldin A

CD3

IL-3

MP2-8F8

Purified CD4+ T cells stimulated with immobilized **-CD3 (10 μg/ml) + soluble **-CD28 (2 μg/ml) + IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 + IL-4 for 3-4 days

PMA (20 ng/ml)plusionomycin (1μg/ml)

4-6 h

monensin or brefeldin A

CD4

GM-CSF

MP1-22E9

Splenocytes stimulated with immobilized **-CD3 (10 μg/ml) + soluble **-CD28 (2 μg/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 3-4 day

PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml)

4-6 h

monensin or brefeldin A

CD3

IFN-γ

XMG1.2

Splenocytes

PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml)

4-6 h

monensin or brefeldin A

CD3

相關產(chǎn)品:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價格/

WU047

Monensin Solution (1,000×) 莫能霉素溶液(1,000×)

1ml

98

WU077

Monensin, Sodium Salt  莫能霉素(鈉鹽)

100mg

460

WU060

Ionomycin, Free Base 離子霉素(游離酸)

1mg

535

WU070

Ionomycin, Free Base 離子霉素(游離酸)

5mg

1720

WU072

Ionomycin, Calcium Salt 離子霉素(鈣鹽)

1mg

535

WU074

Ionomycin, Calcium Salt 離子霉素(鈣鹽)

5mg

1720

WU045

Brefeldin A (BFA, 5mg/ml)  布雷非德菌素A5mg/ml

200μl

410

WU065

Brefeldin A (BFA, 5mg/ml)  布雷非德菌素A5mg/ml

1ml

1500

WU085

Brefeldin A (BFA, Powder)  布雷非德菌素A(粉末)

5mg

1200

WU061

PMA (TPA, 5mg/ml) 佛波肉荳蔻醋酸(5mg/ml

200μl

445

WU062

PMA (TPA, Powder) 佛波肉荳蔻醋酸(粉末,超純)

5mg

1780

WU055

Calcium Ionophore A23187鈣離子載體

1mg

320

保存與運輸方法

保存:-20°C避光保存2年有效。運輸:冰袋運輸。

注意事項

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。



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