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簡介：

蘇木素是從洋蘇木中提取的一種染色劑，它在被氧化后生成蘇木精，同媒染劑（常用的是三價的鐵或鋁的鹽）一起使用，能夠使細胞核染色，是一種堿性染料。蘇木素和伊紅在組織學上被經(jīng)常使用，與碘液不同，這是一種永久染色劑，這兩個聯(lián)合染色簡稱HE染色，是病理學和組織學最常用的一種染色方法。在水溶液中，特別是在堿溶液中易被空氣氧化成紅棕色的氧化蘇木精。蘇木精不能直接染色，必須暴露在通氣的地方，使他變成氧化蘇木精（又叫蘇木素）后才能使用，蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質的主要成分是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。

沃博生物蘇木素染色液無毒無汞無氧化膜，細胞核染色質著色深而細微。其特點是蘇木素被氧化的程度高，染色力強，染色后需要鹽酸乙醇分化，屬于退行性染色。該產(chǎn)品僅適用于科研實驗，不可做他用。

染色原理：

1、 細胞核染色的原理：

蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

2、 細胞漿染色的原理：

伊紅是一種化學合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值密切相關。當染色液pH值在胞漿蛋白質等電點(4.7～5.0)以下時，胞漿蛋白質以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質帶正電荷的陽離子結合，使細胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

3、 分化作用：

染色后，用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結構，使組織與色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。

4、 返藍作用：

分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現(xiàn)藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細 胞核返藍，但所需時間較長。

自備材料：

1、 鹽酸乙醇分化液

2、 藍化液，如稀氨水、碳酸鋰溶液等

3、 系列乙醇

4、 伊紅染色液

5、 4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考)：

(一)石蠟切片染色

1、 切片脫蠟至水

①二甲苯作用。

②(可選)無水乙醇作用。

③ 95%的乙醇

④ 90%的乙醇

⑤ 80%的乙醇

⑥自來水或蒸餾水沖洗

2、染色

①蘇木素染色液染色

②自來水或蒸餾水沖洗

③ (可選)鹽酸乙醇分化

④自來水沖洗

⑤(可選)藍化液返藍

⑥自來水沖洗

⑦伊紅染色液染色

⑧自來水沖洗

3、脫水、透明、封固

①80%乙醇

② 90%乙醇

③95%乙醇作用。

④無水乙醇作用。

⑤二甲苯透明。

⑥中性樹脂封片。

染色結果：

(二)細胞染色

1、 多聚甲醛固定。

2、 自來水沖洗。

3、 蒸餾水沖洗。

4、 染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，作用時間應相應縮短。

染色結果：

注意事項：

1、 切片脫蠟應盡量干凈。

2、 系列乙醇應經(jīng)常更換新液。

3、 鹽酸乙醇分化時間應根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應該足夠，以便徹底清洗酸。

4、 乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，密閉保存。

5、 冷凍切片染色時間盡量要短。

6、 藍化液常使用0.2～1%氨水或Scott促藍液或0.1～1%碳酸鋰溶液。

7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。