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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin, WGA）是一種能與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合的凝集素。作為生物學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域研究最深入且最具實(shí)用價(jià)值的凝集素之一，WGA因其與糖綴合物的結(jié)合特性，其衍生物和偶聯(lián)物被廣泛用于細(xì)胞膜及纖維化瘢痕組織的熒光標(biāo)記與成像分析。WGA的糖結(jié)合特異性針對(duì)β-1,4-葡萄糖胺連接殘基序列（即殼多糖寡糖）。每個(gè)單體含有兩個(gè)相同且互不干擾的結(jié)合位點(diǎn)，可特異性識(shí)別3至4個(gè)β-1,4-葡萄糖胺單元。在已檢測(cè)的單糖中，僅N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）能與WGA結(jié)合；N-乙酰甘露糖胺（ManNAc）無(wú)結(jié)合能力；N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）僅呈現(xiàn)微弱結(jié)合。WGA對(duì)含重復(fù)序列Galβ(1→4)GlcNAcβ(1→3)（即多聚乳糖胺型聚糖）的大分子寡糖內(nèi)部GlcNAc殘基具有高親和力結(jié)合。N-乙酰神經(jīng)氨酸僅與WGA發(fā)生低親和力相互作用。WGA展現(xiàn)出復(fù)雜的糖特異性模式，可用于復(fù)雜碳水化合物的結(jié)構(gòu)分析。iFluor®488標(biāo)記的WGA可能是目前熒光強(qiáng)度最高的WGA偶聯(lián)物，其呈現(xiàn)iFluor®488染料特有的明亮綠色熒光。該偶聯(lián)物與AF488 WGA偶聯(lián)物類似，能特異性結(jié)合唾液酸和N-乙酰葡萄糖胺殘基。

產(chǎn)品性質(zhì)

Ex (nm)：491

Em (nm)：516

溶劑：Water

適用儀器

熒光顯微鏡  

Ex:               FITC 濾波片組

Em：            FITC 濾波片組

推薦孔板:          黑色透明底板

儲(chǔ)備液的配制

除非另有說(shuō)明，所有未使用的儲(chǔ)備液應(yīng)在配制后分裝為單次使用量，并儲(chǔ)存于-20℃。避免反復(fù)凍融。

iFluor® 488-麥胚凝集素（WGA）偶聯(lián)物儲(chǔ)備液（200倍濃縮）：將500微升ddH₂O加入粉末中，配制成2毫克/毫升的儲(chǔ)備液。

注意：復(fù)溶后的偶聯(lián)物溶液可短期儲(chǔ)存于2-8℃，長(zhǎng)期儲(chǔ)存需置于-20℃。

工作液的配制

iFluor® 488-麥胚凝集素（WGA）偶聯(lián)物工作液（1倍濃度）：取5微升200倍濃縮的WGA偶聯(lián)物溶液，加入1毫升HHBS緩沖液中。

注意：最佳染色濃度可能因細(xì)胞系不同而有所差異。推薦活細(xì)胞起始濃度為5-10微克/毫升。

實(shí)驗(yàn)操作參考

將小瓶置于室溫下回溫，開(kāi)啟前短暫離心。染色方案因應(yīng)用場(chǎng)景而異，偶聯(lián)物的適當(dāng)稀釋比例需通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。

活細(xì)胞染色;

1、用HHBS緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。

2、加入100微升iFluor® 488-WGA工作液。

3、在37℃條件下，用WGA工作液孵育細(xì)胞10-30分鐘。

4、用HHBS緩沖液再次洗滌細(xì)胞兩次。

5、在熒光顯微鏡下使用FITC濾光片組觀察細(xì)胞成像。

固定細(xì)胞染色：WGA偶聯(lián)物也可用于固定細(xì)胞染色。

1、用含4%多聚甲醛的PBS溶液固定細(xì)胞。

注意：若進(jìn)行固定細(xì)胞膜染色，建議省略透化步驟。若在固定后增加透化步驟，則有助于對(duì)細(xì)胞內(nèi)區(qū)室（如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)）進(jìn)行染色。

2、加入100 µL iFluor® 488-WGA工作液。

3、將細(xì)胞與WGA工作液在室溫下孵育10-30分鐘。

4、用HHBS緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。

5、使用熒光顯微鏡配合FITC濾光片組對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成像。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。在零下15度以下保存, 避免光照。

注意事項(xiàng) ：

1、該產(chǎn)品不適用于革蘭氏陰性細(xì)菌。

2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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