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工作原理：

本產(chǎn)品采用層析式雙抗體夾心法快速檢測核酸擴(kuò)增產(chǎn)物。與傳統(tǒng)的瓊脂糖凝膠電泳檢測相比，核酸檢測試紙條操作簡單，判讀迅速，不含有毒物質(zhì)，無需任何儀器設(shè)備。用戶僅需在第一個檢測序列引物設(shè)計時將一條引物/探針標(biāo)記生物素Biotin，另一條引物/探針標(biāo)記地高辛Digoxin，在第二個檢測序引物設(shè)計時將一條引物/探針標(biāo)記生物素Biotin，另一條引物/探針標(biāo)記異硫氰酸熒光素FITC或6-羧基熒光素6-FAM.在第三個檢測序引物設(shè)計時將一條引物/探針標(biāo)記生物素Biotin，另一條引物/探針標(biāo)記羅丹明TAMRA見下表。并確保兩種標(biāo)記物可同時整合到雙鏈擴(kuò)增產(chǎn)物上，即可使用本產(chǎn)品進(jìn)行檢測。如果采用內(nèi)參設(shè)計，請將內(nèi)參片段標(biāo)記物設(shè)計為羅丹明。

標(biāo)記方案： ??1. 5’??Biotin-----5‘ Digoxin ?

2.?5’?’Biotin----5‘ FAM(FITC)

3.?5 ’Biotin----5‘ TAMRA

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預(yù)期用途:?

核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測。

包裝規(guī)格/貨號:

包裝規(guī)格：10條/包×5，鋁箔袋防潮包裝。

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? 圖1.?一次性核酸檢測試紙條結(jié)構(gòu)示意圖

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儲存條件及有效期:

儲存條件：存放于避光干燥處，儲存溫度4~30℃。

有效期：12個月。

操作步驟:

1.?根據(jù)檢測樣品數(shù)量取出相應(yīng)數(shù)量的試紙條，并在吸收墊（圖1）上做好標(biāo)記。每根試紙條只能用于單次、單個樣品的檢測。擴(kuò)增產(chǎn)物體積為50~100μL時，可直接在200μL PCR反應(yīng)管中檢測核酸產(chǎn)物，產(chǎn)物體積不足50μL時，需在PCR管內(nèi)加超純水補(bǔ)足體積至50μL，吸打混勻后，才能進(jìn)行檢測。

2.?PCR、RPA或RAA反應(yīng)結(jié)束后，打開PCR反應(yīng)管，將試紙條結(jié)合墊端（箭頭端）插入PCR反應(yīng)管（圖1），液面不得超過結(jié)合墊最上端，待判讀區(qū)全部浸潤（約需1～2min，外界環(huán)境溫度較低時，如冬季，會降低吸水速度，判讀區(qū)浸潤時間將會延長），待質(zhì)控線（C線）顯色后，可以將試紙條拿出。根據(jù)試紙條顯色情況直接讀取檢測結(jié)果。

3.?質(zhì)控線（C線）顯色后10min內(nèi)觀察結(jié)果，10min后判讀無效。

4.?記錄檢測結(jié)果，將試紙條密封丟棄在安全處。

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結(jié)果判讀:

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? ? ? ? ? ? ? ?圖2. 一次性核酸檢測試紙條結(jié)果判讀示意圖

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1.?陽性（+）：

試紙條出現(xiàn)一條藍(lán)色條帶,位于質(zhì)控線（C線）;2條紅色條帶,位于檢測線（T線）。陽性結(jié)果表明樣本中含有待檢測的核酸片段，且其數(shù)量≥試紙條的最低檢出量。當(dāng)目的核酸產(chǎn)物濃度較低時，試紙條C線顯色呈藍(lán)色，T線呈淡紅色，甚至淺粉色條帶，該結(jié)果也應(yīng)判定為陽性。當(dāng)目的核酸產(chǎn)物濃度較高時，試紙條C線顯色呈紅色，T線呈紅色，該結(jié)果也應(yīng)判定為陽性。

2.?陰性（-）：

試紙條質(zhì)控線（C線）出現(xiàn)一條藍(lán)色條帶，檢測線（T線）沒有條帶。陰性結(jié)果表明樣本中不含目的核酸片段，或其數(shù)量低于試紙條的最低檢出量。

3.?無效：

試紙條質(zhì)控線（C線）和檢測線（T線）均未出現(xiàn)條帶，提示所用的試紙條或擴(kuò)增試劑可能已經(jīng)損壞、失效或操作有誤。

此時，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，重新擴(kuò)增和檢測。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用同一批號的產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。

注意事項及安全提示:

1.?本產(chǎn)品僅供科研使用。使用前請仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書操作。違反或者未按說明書進(jìn)行操作可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。

2.?產(chǎn)品應(yīng)依照說明書要求，儲存于合適的環(huán)境和溫度下，并在有效期內(nèi)使用。儲存不當(dāng)或產(chǎn)品過期可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。打開包裝后請盡快使用試紙條，以免因試紙條受潮影響試驗結(jié)果。檢測環(huán)境光線不足，操作者色弱等因素均可能能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。

3.?使用完畢后，應(yīng)盡快將紙條裝進(jìn)密封袋，妥善處理。本產(chǎn)品為一次性使用產(chǎn)品，請勿重復(fù)使用。

4.?收到該產(chǎn)品后，用該產(chǎn)品每個指標(biāo)單獨(dú)檢測，每個指標(biāo)擴(kuò)增后都在準(zhǔn)確的位置，并沒有假陽性。再驗證該指標(biāo)的引物體系的靈敏度。當(dāng)2個指標(biāo)處于同一個靈敏度水平后，用雙引物體系擴(kuò)增。再用該產(chǎn)品檢測。