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RNA恒溫快速擴增試劑盒(RNA熒光型)

貨號 B8205C9 售價(元) 1900
規(guī)格 48T CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
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【產(chǎn)品用途】本產(chǎn)品可應用于核酸RNA的快速擴增。

【檢測原理】本產(chǎn)品是基于重組酶介導鏈置換核酸擴增(Recombinase-aid AmplificationRAA)技術開發(fā)的恒溫核酸擴增檢測試劑,在42℃恒溫條件下特異識別并擴增目標樣本的RNA片段,可用Genchek 熒光檢測儀實時監(jiān)控擴增過程,5-20 min 即可完成擴增檢測。

【技術原理】重組酶介導鏈置換核酸擴增(Recombinase-aid Amplification,RAA),是一種恒溫核酸快速擴增技術。 RT-RAA先利用逆轉(zhuǎn)錄酶將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA,從細菌或真菌中獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結(jié)合,形成重組酶/引物復合體,侵入RNA-cDNA雙鏈核酸模板,在侵入位點重組酶將雙鏈打開,同時單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合到被重組酶打開的單鏈上,維持雙鏈模板處于開鏈狀態(tài)。重組酶/引物復合體開始對雙鏈進行掃描,當引物在模板上搜索到與之完全匹配的互補序列時,重組酶/引物復合體解體,DNA聚合酶結(jié)合到引物的3端,開始合成新鏈。成的新鏈又可 以作為模板,最終擴增產(chǎn)物以指數(shù)級增長,完成靶標基因的擴增。經(jīng)過熒光標記的探針與擴增產(chǎn)物結(jié)合,當探針被核酸外切酶酶切后發(fā)出熒光信號,可對擴增過程進行實時監(jiān)控。本試劑盒具有快速、靈敏度高以及特異性強等優(yōu)點,反應組分已混合并冷凍干燥成反應干粉,操作簡便,易于保存。

【引物設計與探針設計】

引物設計建議方法:RAA核酸擴增技術對引物設計的要求與常規(guī)PCR引物設計有一定的區(qū)別。由兩條寡核苷酸組成一對引物,分別特異性識別一個核酸目標物的上下游核苷酸序列;引物長度在30-35nt之間,序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復序列和內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)區(qū);引物Tm值不作為設計時主要考慮因素;最佳引物對需通過試驗優(yōu)化篩選得到,要求其擴增產(chǎn)物為單一條帶,無非特異性擴增和明顯的引物二聚體。

探針設計建議方法:探針序列不與引物識別位點重疊,長度在46-52 nt之間,序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復堿基;共有四個修飾位點,距離 5端的35 nt的中部位置標記一個 dSpacer(四氫呋喃,THF),作為核酸外切酶的識別位點;THF 位點的上游標記一個熒光基團,下游標記一個淬滅基團,兩個基團的間距為 2-4 ntTHF 距離3末端15nt;在3末端標記一個修飾基團,例如胺基、磷酸基團、生物素、生物素-TEG C3-spacer。

建議:在開展 RT-RAA (熒光型)擴增反應之前,先進行引物的篩選試驗, 以便得到較高的檢測靈敏度

產(chǎn)品說明書:B8205C9 RNA恒溫快速擴增試劑盒(RT-RAA熒光型).pdf (168.6 K)

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