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紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）檢測試劑盒（微量法,100T/48S）
| 貨號 | SH0608 | 售價（元） | 1740 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0608 |
紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）檢測試劑盒（微量法,100T/48S） |
100T/48S |
測定意義：
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的酶系，在外源物質(zhì)代謝中，尤其是藥物和毒物的代謝，具有重要作用。ERND在P450酶系中相當于CYP2B亞型，與藥物代謝的去甲基化密切相關。CYP2B具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產(chǎn)物而具有解毒作用，也可使某些藥物經(jīng)CYP2B代謝活化。
測定原理：
ERND催化紅霉素釋放甲醛，通過Nash比色測定甲醛含量，即可計算出ERND活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0608-100T/48S |
Storage |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1管 |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑六：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑七：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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標準液：液體 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加100ml蒸餾水溶解。
試劑三：粉劑×1管，4℃保存。臨用前加1ml蒸餾水，充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加0.5ml蒸餾水，充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前，加蒸餾水4.5ml充分溶解。
標準液：液體×1瓶，-20℃保存。臨用前取1.5ml EP 管，加入10μl標準液，加990μl蒸餾水，混勻即為0.05 mmol/L標準甲醛溶液，4℃保存。
自備儀器和用品：
普通離心機，超速離心機、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和冰。
粗酶液提取：
1、除去細胞核，線粒體等大分子物質(zhì)：稱約0.5g組織，加入1ml試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)入超速離心管中。
2、粗制微粒體：100 000g，4℃，離心60min，棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1ml試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。
4、最終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二0.5ml，充分震蕩溶解，即粗酶液，待測。該待測液需當天使用。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 對照管：取0.5ml EP管，加入10μl粗酶液，170μl試劑二，10μl試劑三，10μl蒸餾水，混勻后置于37℃水浴保溫30min；立即加入35μl試劑五，混勻后置于冰浴中5min；取出后加入35μl試劑六，混勻后室溫靜置5min；室溫8000rpm離心5min；取新的EP管，加入100μl上清液，100μl試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測定光吸收，記為A對照管。
4. 測定管：取0.5ml EP管，加入10μl粗酶液，170μl試劑二，10μl試劑三，10μl試劑四，混勻后置于37℃水浴保溫30min；立即加入35μl試劑五，混勻后置于冰浴中5min；取出后加入35μl試劑六，混勻后室溫靜置5min；室溫8000rpm離心5min；取新EP管，加入100μl上清液，100μl試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測定光吸收，記為A測定管。
5. 標準管：取0.5ml EP管，加入100μl標準品，100μl試劑七，混勻后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷卻5min，于412nm測定光吸收，記為A標準管。
注意：每個樣品都需要做對照管。
ERND活性計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按照蛋白濃度計算:
活性單位定義：37℃下，每分鐘每毫克蛋白催化產(chǎn)生1nmol甲醛為1個酶活單位。
ERND活性(nmol/min/mg prot) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V樣）÷T
= 45×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷Cpr。
(2). 按照樣本質(zhì)量計算:
活性單位定義：37℃下，每分鐘每克樣品催化產(chǎn)生1nmol甲醛為1個酶活單位。
ERND活性(nmol/min/g 鮮重) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數(shù)÷（W×V樣）÷T
= 45×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷W
C標準品：0.05 mmol/L=50μmol/L；V標準品：100μl=1×10-4 L；稀釋倍數(shù)：V反總÷V上清液=（50+850 +50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣品質(zhì)量，g；V樣：加入粗酶液體積，10μl=0.01ml；T：催化反應時間（min），30min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按照蛋白濃度計算:
活性單位定義：37℃下，每分鐘每毫克蛋白催化產(chǎn)生1nmol甲醛為1個酶活單位。
ERND活性(nmol/min/mg prot) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V樣）÷T
= 45×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷Cpr。
(2). 按照樣本質(zhì)量計算:
活性單位定義：37℃下，每分鐘每克樣品催化產(chǎn)生1nmol甲醛為1個酶活單位。
ERND活性(nmol/min/g 鮮重) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數(shù)÷（W×V樣）÷T
= 45×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷W
C標準品：0.05 mmol/L=50μmol/L；V標準品：100μl=1×10-4 L；稀釋倍數(shù)：V反總÷V上清液=（50+850 +50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣品質(zhì)量，g；V樣：加入粗酶液體積，10μl=0.01ml； T：催化反應時間（min），30min。