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胃蛋白酶檢測試劑盒(微量法 100T/48S)

貨號 SH0592 售價(元) 576
規(guī)格 100T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0592

胃蛋白酶(Pepsin)檢測試劑盒(微量法 100T/48S)

 100T/48S

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌,分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別,慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。

測定原理:

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解,水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍色;一定范圍內(nèi),其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0592-100T/48S

Storage

試劑一:液體

100ml

4℃

試劑二:液體

20ml

4℃

試劑三:粉劑

1

4℃避光

試劑:粉劑

1

4℃

試劑五:粉劑

1

4℃

試劑:液體

3.3ml

4℃

標準品:液體

1.27ml

4℃

說明書

一份

 

試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入10ml試劑二充分溶解。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解。

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入15ml蒸餾水充分溶解。

標準品:液體1.27ml×1支,0.5μmol/ml酪氨酸標準溶液濃度4℃保存。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織樣品按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。

測定步驟:

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至580nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預(yù)熱30min。

3. 標準管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μl標準品,40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于580 nm測光吸收,記為A標準管。

4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μl蒸餾水,40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于 580 nm測光吸收,記為A標準空白管。

5. 對照管: EP管,加入100 μl蒸餾水,置于37℃水浴保溫10min;加入100μl試劑四,蓋緊后搖勻1min;加入20μl粗酶液,混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl,再加入40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于580 nm測光吸收,記為A空白管。

6. 測定管: EP管,加入20μl粗酶液,100μl試劑三,置于37℃水浴保溫10min;加入100μl試劑四,蓋緊后搖勻1min8000g 4℃離心10分鐘取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl,再加入40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于 580 nm測光吸收,記為A測定管。

注意:空白管和標準管只需要測定一次。

計算公式:

a.使用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下

1)按蛋白濃度計算

活性單位定義:37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot= C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷Cpr×V1÷T

=27500×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鮮重)= C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷W×V1÷V2÷T

=27500×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷W

C標準品:標準品濃度,0.5 μmol/ml酪氨酸;稀釋倍數(shù):(20+100+100÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),20μl=2×10-2ml;W:組織質(zhì)量(g);V2:粗酶液總體積(ml),1ml;T:催化反應(yīng)時間(min),10min

b.使用96孔板測定的計算公式如下

((1)按蛋白濃度計算

活性單位定義:37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot= C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷Cpr×V1÷T

=27500×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鮮重)= C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷W×V1÷V2÷T

=27500×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷W

C標準品:標準品濃度,0.5 μmol/ml酪氨酸;稀釋倍數(shù):(20+100+100÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),20μl=2×10-2ml;W:組織質(zhì)量(g);V2:粗酶液總體積(ml),1mlT:催化反應(yīng)時間(min),10min。

注意事項

試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制,配制好用不完的試劑4℃可保存一周。