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胃蛋白酶檢測試劑盒(微量法 100T/48S)
貨號 | SH0592 | 售價(元) | 576 |
規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
SH0592 |
胃蛋白酶(Pepsin)檢測試劑盒(微量法 100T/48S) |
100T/48S |
測定意義:
胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌,分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別,慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。
測定原理:
胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解,水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍色;一定范圍內(nèi),其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
組成:
產(chǎn)品名稱 |
SH0592-100T/48S |
Storage |
試劑一:液體 |
100ml |
4℃ |
試劑二:液體 |
20ml |
4℃ |
試劑三:粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
試劑四:粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
試劑五:粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
試劑六:液體 |
3.3ml |
4℃ |
標準品:液體 |
1.27ml |
4℃ |
說明書 |
一份 |
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入10ml試劑二充分溶解。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入15ml蒸餾水充分溶解。
標準品:液體1.27ml×1支,0.5μmol/ml酪氨酸標準溶液濃度4℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
測定步驟:
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至580nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預(yù)熱30min。
3. 標準管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μl標準品,40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于580 nm測光吸收,記為A標準管。
4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,加入20μl蒸餾水,40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于 580 nm測光吸收,記為A標準空白管。
5. 對照管:取 EP管,加入100 μl蒸餾水,置于37℃水浴保溫10min;加入100μl試劑四,蓋緊后搖勻1min;加入20μl粗酶液,混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl,再加入40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于580 nm測光吸收,記為A空白管。
6. 測定管:取 EP管,加入20μl粗酶液,100μl試劑三,置于37℃水浴保溫10min;加入100μl試劑四,蓋緊后搖勻1min;8000g 4℃離心10分鐘取上清;在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl,再加入40μl試劑二,120μl試劑五,20μl試劑六,混勻后室溫靜置20min,于 580 nm測光吸收,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需要測定一次。
計算公式:
a.使用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下
(1)按蛋白濃度計算
活性單位定義:37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)= C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷(Cpr×V1)÷T
=27500×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鮮重)= C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷(W×V1÷V2)÷T
=27500×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準品:標準品濃度,0.5 μmol/ml酪氨酸;稀釋倍數(shù):(20+100+100)÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),20μl=2×10-2ml;W:組織質(zhì)量(g);V2:粗酶液總體積(ml),1ml;T:催化反應(yīng)時間(min),10min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
((1)按蛋白濃度計算
活性單位定義:37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/mg prot)= C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷(Cpr×V1)÷T
=27500×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性(nmol/min/g 鮮重)= C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×稀釋倍數(shù)÷(W×V1÷V2)÷T
=27500×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準品:標準品濃度,0.5 μmol/ml酪氨酸;稀釋倍數(shù):(20+100+100)÷20=11;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),20μl=2×10-2ml;W:組織質(zhì)量(g);V2:粗酶液總體積(ml),1ml;T:催化反應(yīng)時間(min),10min。
注意事項
試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制,配制好用不完的試劑4℃可保存一周。