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中性蛋白酶測定試劑盒(分光光度法 50T/24S)

貨號 SH0585 售價(元) 696
規(guī)格 50T/24S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0585

中性蛋白酶(Neutral protease, NP)活性測定試劑盒(分光光度法 50T/24S)

50管/24樣

注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

NP在一定的溫度和中性pH條件下,催化水解蛋白質(zhì)。由于其安全無毒、水解能力強、作用范圍廣等特點,中性蛋白酶常用于食品、飼料、化妝品和營養(yǎng)保健品生產(chǎn)。

測定原理:

中性條件下,NP催化酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;在680nm有特征吸收峰。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0585-50T/24S

Storage

試劑一:液體

90ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃

試劑三:粉劑

1

4℃避光

試劑:粉劑

1

4℃

試劑五:液體

10ml

4℃

標準品:液體

1ml

4℃

說明書

一份

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加10 ml蒸餾水溶解。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入20 ml試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發(fā),一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現(xiàn)顆粒物不溶物不影響使用)。

試劑四:粉劑×1瓶, 4℃保存。臨用前加50 ml蒸餾水溶解。

標準品:液體1ml×1支,0.25 μ mol/ml標準酪氨酸溶液,4℃保存。

自備儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、1.5 ml EP管和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。

2、血清或培養(yǎng)液:直接測定。

3、細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1ml試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

測定操作:

1.分光光度計預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到680 nm,蒸餾水調(diào)零。

2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。

3. 對照管:取一支EP管,加入100μl粗酶液,200μl試劑二,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μl試劑三,混勻后8000g, 4℃離心10min;取200μl上清液,加入新的EP管,再加入1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A對照管。

4. 測定管:取一支EP管,加入100μl粗酶液,200μl試劑三,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μl試劑二,混勻后8000g4℃離心10min;取200μl上清液,加入新的EP管,再加入1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A測定管。(注意與空白管不同,先加試劑三,后加試劑二)

5. 空白管:EP管,加入200μl蒸餾水,1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A空白管。

6. 標準管:EP管,加入200μl標準品,1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A標準管。

注意:空白管和標準管只需要測定一次。

計算公式:

1. 按照樣本蛋白濃度計算

NP活性單位定義:30℃每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

NP活性(nmol/min /mg prot= C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計算

NP活性單位定義:30℃每克樣品每分鐘催化水解產(chǎn)生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。

NP活性(nmol/min /g鮮重)=C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷W×V1÷V2÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷W

3. 按照液體體積計算

NP活性單位定義:30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產(chǎn)生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

NP活性(nmol/min/ml=C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷V1÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)

按照細胞數(shù)量計算

NP活性單位定義:30℃104個細胞每分鐘催化水解產(chǎn)生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

NP活性(nmol/min /104 cell=C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷(細胞數(shù)量×V1÷V2÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷細胞數(shù)量

C標準品:0.25 μ mol/ml標準酪氨酸溶液;V反總:酶促反應(yīng)總體積,0.5mlCpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml);V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(ml),0.1 mlV2:提取液總體積(ml),1mlT:催化反應(yīng)時間(min),10min;W:樣品質(zhì)量(g)。

注意事項:

臨用前配制的試劑配制好后4℃保存,并且3天內(nèi)使用完畢。

 

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