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酸性蛋白酶測定試劑盒(分光光度法 50T/24S)

貨號 SH0583 售價(元) 696
規(guī)格 50T/24S CAS號
  • 產品簡介
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貨號

名稱

規(guī)格

SH0583

酸性蛋白酶(Acid protease, ACP)試劑盒(分光光度法 50T/24S)

50管/24樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

ACP是一種在酸性環(huán)境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發(fā)酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。

測定原理:

酸性條件下,ACP催化酪蛋白水解產生酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;鎢藍在680nm有特征吸收峰,通過測定其吸光度增加,來計算ACP活性。

組成:

產品名稱

SH0583-50T/24S

Storage

試劑一:液體一

1.5ml

4℃

試劑一:液體二

1ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃

試劑三:粉劑

1

4℃避光

試劑:粉劑

1

4℃

試劑五:液體

10ml

4℃

標準品:液體

1ml

4℃

說明書

一份

 

試劑一的配制:臨用前按液體一:液體二:蒸餾水=76μl):17μl):18ml)的比例配制,現配現用,如出現白色絮狀沉淀則不能用。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加10 ml蒸餾水溶解。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入20 ml試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發(fā),一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用)。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入50 ml蒸餾水溶解。

標準品:液體1ml×1支,0.25 μ mol/ml標準酪氨酸溶液,4℃保存。

 

自備儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿、1.5 ml EP管和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1.  試劑一的配制:見試劑的組成和配制。

2.  組織:按照組織質量(g):試劑一體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。

3.  血清或培養(yǎng)液:直接測定。

4.  細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1ml試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

測定操作:

1.分光光度計預熱30min,調節(jié)波長到680 nm,蒸餾水調零。

2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min

3. 對照管:取一支EP管,加入100μl粗酶液,200μl試劑二,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μl試劑三,混勻后8000g, 4℃離心10min;取200μl上清液,加入新的EP管,再加入1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A對照管。

4. 測定管:取一支EP管,加入100μl粗酶液,200μl試劑三,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μl試劑二,混勻后8000g, 4℃離心10min;取200μl上清液,加入新的EP管,再加入1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A測定管。(注意與空白管不同,先加試劑三,后加試劑二)

5. 空白管:取EP管,加入200μl蒸餾水,1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A空白管。

6. 標準管:取EP管,加入200μl標準品,1000μl試劑四,200μl試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A標準管。

注意:空白管和標準管只需要測定一次。

ACP活性計算公式:

1. 按照樣本蛋白濃度計算

ACP活性單位定義:30℃每毫克蛋白每分鐘水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性(nmol/min /mg prot= C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷Cpr

2.按照樣本質量計算

ACP活性單位定義:30℃每克樣品每分鐘催化水解產生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性(nmol/min /g鮮重)=C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷W×V1÷V2÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷W

3. 按照液體體積計算

ACP活性單位定義:30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性(nmol/min/ml=C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷V1÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)

按照細胞數量計算

ACP活性單位定義:30℃104個細胞每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性(nmol/min /104 cell=C標準品×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)×V反總÷(細胞數量×V1÷V2÷T= 125×A測定管-A對照管)÷A標準管-A空白管)÷細胞數量

C標準品:0.25 μ mol/ml標準酪氨酸溶液;V反總:酶促反應總體積,0.5ml;Cpr:粗酶液蛋白質濃度(mg/ml);V1:加入反應體系中粗酶液體積(ml),0.1 ml;V2:提取液總體積(ml),1ml;T:催化反應時間(min),10min;W:樣品質量(g)。

注意事項:

1.試劑一按操作指示配制,用多少配多少,出現白色絮狀沉淀則不能用。

2.臨用前配制的試劑配置好后3天內使用完畢。

 

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