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抗壞血酸過氧化物酶（APX）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/48S）
| 貨號(hào) | SH0557 | 售價(jià)（元） | 720 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0557 |
抗壞血酸過氧化物酶（APX）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/48S） |
50管/48樣 |
測(cè)定意義：
APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2氧化AsA，是植物AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影響到AsA的含量，APX與AsA具有一定的負(fù)相關(guān)性。
測(cè)定原理：
APX 催化催化H2O2氧化AsA，通過測(cè)定AsA氧化速率，來(lái)計(jì)算得APX活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0557-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
90ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5ml |
4℃ |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5 ml蒸餾水充分溶解。
自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
測(cè)定：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到290nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min。
3. 依次在1ml石英比色皿中加入100μl上清液、700μl預(yù)熱的試劑一、100μl試劑二和100μl試劑三，迅速混勻后在290nm測(cè)定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A=A1-A2。
APX活性計(jì)算公式：
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
=1786×△A÷ Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：每g組織每分鐘氧化1nmol AsA 為1個(gè)酶活單位。
APX(nmol/min/g鮮重 ) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1786×△A ÷W
ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μl=1×10-3 L；109：1mol=1×109nmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（ml），100μl=0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。
注意事項(xiàng)：
配制好的試劑二4℃保存，并且3天內(nèi)使用完。