丙酮酸磷酸雙激酶（PPDK) 檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0536 | 售價（元） | 2160 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0536 |
丙酮酸磷酸雙激酶（PPDK) 檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
丙酮酸磷酸雙激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是C4途徑和景天科酸代謝途徑的限速酶，催化ATP、丙酮酸和Pi經三步反應生成磷酸烯醇式丙酮酸。該酶主要存在于C4植物的葉綠體基質中，對光合功能具有重要調節(jié)作用。
測定原理：
PPDK的逆向反應催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP和PPi生成丙酮酸、ATP和Pi，乳酸脫氫酶進一步催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，在340nm測定NADH減少速率，計算PPDK活性。
組成：
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產品名稱 |
SH0536-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
25ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
40μl |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三 ：液體40μl×1支，4℃保存；體積較少，若沾在管壁上，臨用前可低速離心后使用。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟和加樣表：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定
（1）工作液的配制：臨用前取試劑二一瓶加入10ml試劑一和5μl試劑三，充分混勻，置于37℃水浴5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本和190μl工作液，混勻，立即記錄340nm處初始吸光值A1和37℃反應5min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
PPDK活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PPDK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PPDK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=643×ΔA÷W
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PPDK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PPDK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=1286×ΔA÷W
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。