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多聚半乳糖醛酸酶（PG）檢測試劑盒說明書（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0509 | 售價(jià)（元） | 1200 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0509 |
多聚半乳糖醛酸酶（PG）檢測試劑盒說明書（微量法100T/48S） |
100T/48S |
測定意義：
多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一種細(xì)胞壁結(jié)合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與果膠的降解，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體，導(dǎo)致果實(shí)軟化，與果實(shí)成熟、葉和花的脫落、病原物防御，細(xì)胞伸展發(fā)育以及木質(zhì)化有關(guān)，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領(lǐng)域具有較高的研究價(jià)值。
測定原理：
多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計(jì)算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0509-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
8ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
15ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
酶液提取：
1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。16000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后16000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3．培養(yǎng)液：直接檢測。
測定操作表：
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對(duì)照管 |
測定管 |
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樣本（μl） |
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30 |
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煮沸樣本（μl） |
30 |
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試劑一（μl） |
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120 |
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蒸餾水 |
120 |
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40℃水浴30min |
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試劑二（μl） |
150 |
150 |
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沸水浴5min，冰浴或自來水冷卻，取200μl于微量石英比色皿/96孔板測定540nm處吸光值A，△A=A測定管-A對(duì)照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
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注意事項(xiàng)：
煮沸樣本建議將樣本在沸水中煮沸10分鐘，以將酶徹底滅活。
酶活性計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3．按液體體積計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量
V反總：反應(yīng)總體積，0.15ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h。
b. 用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
PG活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位（U）。
PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3．按液體體積計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位（U）。
PG活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位（U）。
PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量
V反總：反應(yīng)總體積，0.15ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h。