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尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UGP）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0497 | 售價(jià)（元） | 6000 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0497 |
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UGP）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG）。
測定原理：
UGP可逆催化反應(yīng)生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0497-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑五：液體 |
2ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板
酶液提取：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
測定操作：
1. 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μl試劑一，20μl試劑二，20μl試劑三，20μl試劑四，20μl試劑五，20μl粗酶液，充分混勻，記錄340nm處30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，△A=A2-A1
計(jì)算公式：
a. 使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按照液體體積計(jì)算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=321.54×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
=643.08×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按照液體體積計(jì)算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。
UGP（nmol/min /ml）=ΔA÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=643.08×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g