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脂蛋白酯酶（LPL）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0483 | 售價(jià)（元） | 960 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0483 |
脂蛋白酯酶（LPL）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S） |
100T/48S |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶，可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯，以供組織氧化供能和貯存，并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。
測(cè)定原理：
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0483-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
105ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
4ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
10ml |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。
3. 血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣品（μl） |
20 |
20 |
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試劑一（μl） |
80 |
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試劑二（μl） |
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80 |
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混勻，45℃水浴10min |
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試劑三（μl） |
100 |
100 |
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充分混勻，25℃靜置2min，于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定400nm處吸光值，記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管- A對(duì)照管 |
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計(jì)算公式：
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.0581x -0.0169，R2=0.9982
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/ml）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反總÷V樣÷T
= 17.21×（△A+0.0169）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10min
b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.029x -0.0169，R2=0.9982
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.029×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 34.42×（△A+0.0169）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/g 鮮重）=（△A+0.0169）÷0.029×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 34.42×（△A+0.0169）÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
=34.42×（△A+0.0169）÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性（μmol /min/ml）=（△A+0.0169）÷0.029×V反總÷V樣÷T
= 34.42×（△A+0.0169）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10min
注意事項(xiàng)：
1. 試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測(cè)定，否則影響吸光值。
2. 吸光值過(guò)高或者測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定，則將酶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
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