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脂肪酸合成酶（FAS）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0458 | 售價（元） | 7440 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0458 |
脂肪酸合成酶（FAS）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶，催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
測定原理：
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+沒有；通過測定340nm 光吸收下降速率，計算FAS活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0458-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
-20℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑四：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：液體100ml×1瓶，－20℃保存。用前1d取出置于4℃充分解凍后混勻。
試劑二：粉劑×1瓶。臨用前加入440μl試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入440μl試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入840μl試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心40min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后12000g，4℃，離心40min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
FAS測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑四置于40℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 在96孔板或EP管中依次加入20μl上清液、4μl試劑二、4μl試劑三、164μl試劑四和8μl試劑五，混勻后于340nm處測定吸光值，記錄第30s和90s時吸光值，分別記錄為A1和A2。△A測=A1-A2。
FAS活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：37℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，200μl=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr×V樣)÷T
=3216×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=3216×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：37℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=3216×△A÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。
FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V反總×109 )÷V樣÷T
=3216×△A
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，200μl=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1min。