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錳過(guò)氧化物酶（Mnp）檢測(cè)試劑盒 (分光光度法50T/48S)
| 貨號(hào) | SH0435 | 售價(jià)（元） | 660 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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SH0435 |
錳過(guò)氧化物酶（Mnp）檢測(cè)試劑盒 (分光光度法50T/48S) |
50管/48樣 |
測(cè)定意義：
錳過(guò)氧化物酶（EC1.11.1.13）是一種含亞鐵血紅素的過(guò)氧化物酶，主要存在于擔(dān)子菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物，疊氮化合物、DTT，多環(huán)芳烴等。
測(cè)定原理：
錳過(guò)氧化物酶在Mn2+存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0435-50T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
75ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
5ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
11ml |
4℃避光 |
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試劑四：液體 |
5ml |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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需自備儀器和用品：
天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
酶液提?。?/span>
1、組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1ml試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至465nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測(cè)定前將試劑一、二、三、四在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）放置10min以上。
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試劑名稱(chēng)（μl） |
測(cè)定管 |
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樣本 |
100 |
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試劑一 |
500 |
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試劑二 |
100 |
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試劑三 |
200 |
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試劑四 |
100 |
在1 ml玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄465nm下30s時(shí)的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。
注意事項(xiàng)
若一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑一、二、三、四按比例配成混合液，在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）放置10min以上，測(cè)定時(shí)加入100μl樣本和900μl混合液測(cè)定。
酶活計(jì)算公式：
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/g 鮮重）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 413×ΔA÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 413×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每毫升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
MnP活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T= 413×ΔA
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1×10-3L；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，2min
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