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亞鐵氧化酶（HP）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0422 | 售價(jià)（元） | 1920 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0422 |
亞鐵氧化酶（HP）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S） |
100管/48樣 |
測(cè)定意義：
Hephaestin (HP)作為銅藍(lán)蛋白的同系物,是近年來發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亞鐵氧化酶，HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝。HP的表達(dá)可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+，在介導(dǎo)鐵的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)中有重要作用。
測(cè)定原理：
HP催化Fe2+氧化為Fe3+，Fe2+和ferrozine反應(yīng)顯色，在560 nm下有特征吸光值。通過測(cè)定Fe2+的減少速率可測(cè)得亞鐵氧化酶的活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0422-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1.5ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
11ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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需自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：水（ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至560nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在96孔板中加入下列試劑
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試劑名稱（μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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試劑一 |
50 |
50 |
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試劑二 |
10 |
10 |
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樣本 |
10 |
10 |
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蒸餾水 |
30 |
30 |
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試劑三 |
混勻，40℃靜置30 min |
100 |
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試劑三 |
100 |
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混勻，立即測(cè)定A對(duì)照和A測(cè)定，ΔA=A對(duì)照-A測(cè)定。(每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管)
HP活性計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 8.2135x - 0.0006，R2 = 0.9998；(x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/ml；y為吸光值ΔA)
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義：每g樣本每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個(gè)酶活力單位。
HP（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0006）÷ 8.2135×V總÷T ÷(W× V樣÷V樣總)× 1000= 40.58×（△A+0.0006）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg蛋白每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個(gè)酶活力單位。
HP（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0006）÷ 8.2135×V總÷T ÷（Cpr×V樣） = 40.58×（△A+0.0006）÷Cpr
V總：反應(yīng)體系體積，0.1 ml；V樣：加入樣本體積0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。