土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)

貨號	SH0381	售價（元）	636
規(guī)格	50T/24S	CAS號

貨號	名稱	規(guī)格
SH0381	土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）檢測試劑盒(分光光度法50T/24S)	50管/24樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，參與亞硝酸鹽至NO的還原反應(yīng)，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。

測定原理：

亞硝酸還原酶可將NO₂^—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO₂^—減少，即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。

試劑的組成和配制：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加10ml蒸餾水溶解。

試劑三：液體10ml×1瓶，4℃保存。（如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解；

試劑四：液體25ml×1瓶，4℃避光保存。（如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解；

工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。

自備儀器和用品：

天平、可見分光光度計、水浴鍋、低溫離心機、1ml玻璃比色皿。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測定操作表：

	空白管	對照管	測定管
風(fēng)干土樣（g）		0.1	0.1
蒸餾水（μl）		200
試劑一（μl）	200		200
試劑二（μl）	200	200	200
混勻后，25℃反應(yīng)1h
試劑三（μl）	200	200	200
充分震蕩30S，10000rpm，4℃，離心10min
上清液（μl）	500	500	500
工作液（μl）	1000	1000	1000
充分混勻，用蒸餾水調(diào)零，靜置3min后測定540nm處各管吸光值，分別記為A空白管、A對照管、A測定管。

計算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.5562x+ 0.0088，R²= 0.996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y為吸光值（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）。

酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO₂^ˉ的量為一個酶活力單位。

S-NiR（μmol /d /g土樣）=[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088] ×V標(biāo)÷1.5562÷W÷T

= 3.084×[A空白管-(A測定管-A對照管) -0.0088]÷W

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d；V標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.2ml； W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項：

1. 配制好的工作液3天內(nèi)使用完。

2. 若吸光值超過3，將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 嚴(yán)格控制顯色時間，否則會對結(jié)果有影響。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

5. A空白管-（A測定管-A對照管）線性范圍為0.02-3。

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