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淀粉脫分支酶檢測試劑盒(分光光度法 50T/24S)

貨號 SH0289 售價(元) 1140
規(guī)格 50T/24S CAS號
  • 產品簡介
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貨號

名稱

規(guī)格

SH0289

淀粉脫分支酶(Starch debranching enzyme,DBE)試劑盒(分光光度法 50T/24S)

50管/24樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

DBE能夠專一性地裂解支鏈淀粉的α-1,6糖苷鍵,產生線性的葡萄糖鏈,在調整支鏈淀粉分子的鏈長方面有重要的作用。

測定原理:

采用3,5-二硝基水楊酸法測定DBE催化支鏈淀粉產生的還原糖,通過測定還原糖含量的變化來計算DBE活性。

組成:

產品名稱

SH0289-50T/24S

Storage

提取液液體

60ml

4

試劑一:液體

15ml

4

試劑二:粉劑

1

4

試劑液體

12ml

4

試劑四:液體

35ml

4

說明書

1

 

試劑二臨用前每支加入6ml試劑一,充分混勻后備用;用不完的試劑4℃保存;

 

自備儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

粗酶液制備:

按照組織質量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長到540 nm,蒸餾水調零。

2、加樣表

試劑名稱(μl

對照管

測定管

95℃水浴5min后滅樣本

200

 

粗酶液

 

200

試劑一

200

 

試劑二

 

200

混勻,37準確保溫2h

試劑三

200

200

試劑四

600

600

混勻,95℃水浴5min,于1ml玻璃比色皿540nm處讀取各管吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設個一個對照管。

注意:可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。

DBE活力單位的計算

標準條件測定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165x為標準品濃度(mg/ml),y為吸光值。

1)按照蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每h催化產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷W

V反總:反應體系總體積,0.4ml; V樣:加入樣本體積,0.2mlV樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應時間,2 h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/ml;W:樣本質量,g。

標準曲線線性范圍為0.1mg/ml-1mg/ml。

ΔA線性范圍為0.01-2